虾蟹类饲料中β-蜕皮甾酮的测定 高效液相色谱法.docxVIP

ICS65.120

B46

团体标准

T/GAIA035—2025

虾蟹类饲料中β-蜕皮甾酮的测定高效液相色谱法

Determinationofβ-ecdysteroneinshrimpandcrabfeedsHighperformanceliquidchromatography

2025-12-11发布2025-12-18实施

广东省分析测试协会发布

T/GAIA035—2025

I

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由广东省分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、广州市华莱科检测技术有限公司、广东蔚莱生物科技有限公司、西北农林科技大学、广东德宁水产科技有限公司、广州飞禧特生物科技有限公司、沈阳师范大学、长江大学、天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心、广东科贸职业学院、广东省粤东技师学院。

本文件主要起草人：王和平、吴仕辉、孙凤刚、王建龙、陈宇航、黄燕华、杨庆余、阮国良、史艳艳、周漪波、黄芙蓉、夏旻灏、付尽国、李圣男、邱星群、蔡丹敏、张飞、张丽、黄启红、谢钦杰、吴斌、赵健、潘灿盛、夏冰、温才洁、魏远美、梁洁怡、凌嘉豪、胡启之、周启动。

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虾蟹类饲料中β-蜕皮甾酮的测定高效液相色谱法

1范围

本文件描述了虾蟹类饲料中β-蜕皮甾酮的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于虾蟹类饲料中β-蜕皮甾酮的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的β-蜕皮甾酮经40%甲醇溶液提取后，高效液相色谱分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。

5试剂或材料

5.1甲醇：色谱纯。

5.240%甲醇溶液：量取400mL甲醇，用水稀释至1000mL，混匀。

5.3β-蜕皮甾酮（CAS：5289-74-7）：纯度不低于98%，或经国家认证并授予证书的标准物质或标准样品。

5.4β-蜕皮甾酮标准储备溶液（200mg/L）：准确称取10mg（精确至0.01mg）标准物质或标准样品，用40%甲醇溶液超声溶解，放冷至室温，转移至50mL容量瓶中，用40%甲醇溶液定容，混匀，转移至密闭瓶内于4℃下避光保存，有效期6个月。

5.5β-蜕皮甾酮系列标准工作溶液：分别移取适量β-蜕皮甾酮标准储备溶液（200mg/L），用40%甲醇溶液配制成质量浓度分别为0.200mg/L、0.500mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的系列标准工作溶液，转移至密闭瓶内于4℃下避光保存，有效期2个月。

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6仪器设备

6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或相当者。

6.2分析天平：感量0.1mg。

6.3分析天平：感量0.01mg。

6.4超声波发生器：工作频率40kHz，功率不低于500W，或可相当的设备。

6.5离心机：最高转速不低于4000r/min。

7分析步骤

7.1试样制备

按照GB/T20195制备试样，至少200g，粉碎使其通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀，装入密闭容器中，备用。

7.2试样提取

称取试样约1.0g（精确至0.1mg），或根据标示含量使所取试样中β-蜕皮甾酮含量约为0.1mg，置于50mL具塞离心管内，加入30mL的40%甲醇溶液超声提取20min，4000r/min离心5min，上清液转移至50mL容量瓶，残渣再加入15mL的40%甲醇溶液，重复超声提取一次，合并上清液并定容至50mL，用0.45μm尼龙微膜过滤，上机测试。

注：根据试样溶液中β-蜕皮甾酮的浓度高低，可进行适当的稀释，确保上机浓度在标准曲线的线性范围内。

7.3色谱参考条件

色谱参考条件如下：

a)色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，或性能相当者；

b)流动相：A相为水；B相为甲醇。梯度洗脱条件见表1