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玉米大斑病菌StCHS5基因过表达突变体的构建及功能解析：揭示其在病菌生长与致病中的角色

一、引言

1.1研究背景

1.1.1玉米大斑病的危害及现状

玉米作为全球重要的粮食作物，在保障粮食安全和推动农业经济发展中发挥着举足轻重的作用。然而，玉米大斑病的频繁侵袭，给玉米生产带来了巨大的挑战。

玉米大斑病是一种由大斑凸脐蠕孢（Setosphaeriaturcica）引起的叶部病害，在世界各玉米产区均有分布，在我国主要分布于东北、华北春玉米区以及南方海拔较高、气温较低的山区。其病原菌以休眠菌丝体在病株残体内越冬，成为次年的主要初侵染源，分生孢子也可在病株残体上越冬，种子携带少量病原菌亦是侵染来源之一。在玉米生长季节，越冬病菌产生孢子，借助雨水飞溅或气流传播至玉米叶片，在适宜的温湿度条件下萌发入侵。在感病品种上，病菌迅速扩展，约14天即可引发局部萎蔫和组织坏死，形成枯死病斑。在潮湿气候条件下，病斑上会产生大量分生孢子，通过气流传播进行多次再侵染，进而导致病害流行。

玉米大斑病主要侵害玉米的叶片、叶鞘和苞叶。发病初期，叶片上出现水渍状青灰色斑点，随后沿叶脉向两端扩展，形成边缘暗褐色、中央淡褐色或青灰色的大斑，严重时病斑融合，致使叶片变黄枯死，极大地降低了叶片的光合作用效率。这不仅阻碍了植株的养分制造和输送，导致玉米果穗发育不良，籽粒数量减少、不饱满，千粒重下降，还显著降低了玉米的产量和品质。在大发生年份，一般可造成15%-20%的减产，严重时减产幅度可达50%以上，甚至绝收。

目前，针对玉米大斑病的防治主要采用农业防治、化学防治和选育抗病品种等措施。农业防治涵盖轮作倒茬、清除病残体、合理密植以及科学施肥等手段，旨在减少病原菌数量，增强植株抗病能力。化学防治则是在发病初期及时喷施杀菌剂，如吡唑醚菌酯、戊唑醇等，以抑制病原菌的扩散，但长期大量使用化学农药易使病原菌产生抗药性，对环境造成负面影响。选育抗病品种是防治玉米大斑病最为经济有效的方法，然而，由于病原菌的变异，新的致病小种不断涌现，使得抗病品种的选育工作面临诸多困难。因此，深入探究玉米大斑病菌的致病机制，对于开发新型防治策略具有重要的现实意义。

1.1.2真菌几丁质合成酶的研究进展

真菌细胞壁作为细胞的重要结构，对维持细胞形态、保护细胞以及参与细胞的物质交换和信号传递等过程起着关键作用。几丁质作为真菌细胞壁的重要组成成分，由N-乙酰葡萄糖胺通过β-1,4-糖苷键连接而成，是一种线性多糖。它赋予细胞壁刚性和强度，对真菌的生存和繁衍至关重要。

真菌几丁质合成酶（ChitinSynthase，CHS）是催化几丁质合成的关键酶，在真菌细胞壁的合成过程中扮演着核心角色。它能够利用尿苷二磷酸-N-乙酰葡萄糖胺（UDP-GlcNAc）作为底物，将N-乙酰葡萄糖胺残基转移到正在生长的几丁质链上，从而实现几丁质的合成。根据氨基酸序列的相似性和结构特点，真菌几丁质合成酶可分为多个家族，不同家族的几丁质合成酶在真菌的生长发育、形态建成和致病过程中发挥着不同的功能。

在酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）中，已发现多个几丁质合成酶基因，如CHS1、CHS2和CHS3等。其中，CHS2在细胞分裂过程中参与隔膜的形成；CHS3则主要负责菌丝细胞壁的合成，对维持菌丝的形态和结构稳定性至关重要。在丝状真菌构巢曲霉（Aspergillusnidulans）中，几丁质合成酶基因chsA、chsB和chsC等分别在不同的生长阶段和细胞部位发挥作用，chsA参与分生孢子壁的合成，chsB与菌丝体的生长和细胞壁的完整性有关，chsC则在菌丝尖端的细胞壁合成中起重要作用。

在植物病原真菌中，几丁质合成酶同样与病菌的致病性密切相关。稻瘟病菌（Magnaportheoryzae）的几丁质合成酶基因MoCHS1和MoCHS3等参与了病菌侵染结构的形成和侵染过程。敲除MoCHS1基因会导致稻瘟病菌附着胞的形成受阻，侵染能力显著下降；而MoCHS3基因的缺失则会影响病菌细胞壁的完整性，降低其对水稻的致病性。在玉米小斑病菌（Cochliobolusheterostrophus）中，几丁质合成酶基因的表达变化与病菌的生长和致病能力相关，干扰几丁质合成酶基因的表达可削弱病菌的致病性。

鉴于几丁质在植物和脊椎动物中不存在，而在真菌中具有重要作用，真菌几丁质合成酶成为研发新型杀菌剂和抗真菌药物的重要靶点。深入研究真菌几丁质合成酶的结构与功能，对于揭示真菌的生长发育和致病机制，开发高效、安全的防治真菌病害的方法具有重要的理论和实践意义。

1.2玉米大斑病菌几丁质合成酶基因StCHS5的研究意义

玉米大斑病菌的生长发育和致病过