超声微泡介导反义磷酸受纳蛋白基因转染的机制、效果与应用前景.docxVIP

超声微泡介导反义磷酸受纳蛋白基因转染的机制、效果与应用前景

一、引言

1.1研究背景与意义

心血管疾病已然成为全球范围内威胁人类健康的重大公共卫生问题，其高发病率、高致残率和高死亡率给社会和家庭带来了沉重的负担。据统计，心血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位，农村为44.8%，城市为41.9%，目前患病人数约为2.9亿，包括脑卒中1300万人，冠心病1100万人，心力衰竭450万人，高血压2.45亿人。常见的心血管疾病如冠心病、心肌病、心力衰竭等，不仅严重影响患者的生活质量，还使患者面临着极高的生命危险。传统的治疗方法，如药物治疗、介入治疗和手术治疗等，虽然在一定程度上能够缓解症状，但对于一些复杂的心血管疾病，往往难以达到根治的效果。

基因治疗作为一种新兴的治疗手段，为心血管疾病的治疗带来了新的希望。它通过将正常基因或有治疗作用的基因导入靶细胞，以纠正或补偿基因的缺陷，关闭或抑制异常表达的基因，从而达到治疗疾病的目的。对于肥厚型、扩张型心肌病及高胆固醇血症等单基因遗传病，创新的基因治疗策略通过补充基因突变引发的蛋白缺失，或通过基因编辑技术修复突变以恢复蛋白功能，显示出显著疗效。然而，基因治疗在实际应用中面临着诸多挑战，其中基因转染效率低和靶向性差是亟待解决的关键问题。

超声微泡介导的基因转染技术应运而生，为解决这些问题提供了新的途径。该技术利用超声微泡作为基因载体，在超声的作用下，微泡发生破裂，产生空化效应、微射流和冲击波等，使细胞膜通透性增加，促进基因进入细胞，从而提高基因转染效率。同时，通过对微泡进行靶向修饰，可实现基因的靶向递送，增强治疗的精准性。磷酸受纳蛋白（Phospholamban，PLB）在心肌收缩和舒张功能中起着关键的调节作用。在心力衰竭等心血管疾病中，PLB的表达异常会导致心肌肌浆网钙调控失衡，进而影响心肌的正常功能。通过反义磷酸受纳蛋白基因转染，抑制PLB的表达，有望恢复心肌细胞中肌浆网钙ATP酶（SERCA2a）/PLB的正常比率关系，改善心肌舒缩功能，为心血管疾病的治疗提供新的策略。

本研究聚焦于超声微泡介导反义磷酸受纳蛋白基因转染效应，具有重要的理论意义和临床应用价值。从理论层面来看，深入探究该转染效应有助于揭示基因治疗心血管疾病的潜在机制，丰富基因治疗的理论体系，为后续的研究提供坚实的理论基础。在临床应用方面，若能成功提高基因转染效率和靶向性，将为心血管疾病患者带来更为有效的治疗方案，显著改善患者的预后和生活质量，具有广阔的应用前景和社会效益。

1.2国内外研究现状

在超声微泡介导基因转染技术方面，国内外学者开展了大量的研究工作。超声靶向微泡破坏（UTMD）技术作为一种新兴的靶向给药及基因转运方法，受到了广泛关注。该技术以超声微泡造影剂作为药物或基因转送的载体，主要作用机制是声孔作用，即胞膜上形成的瞬时孔。超声辐照于靶组织或靶器官，促使靶部位载基因或载药微泡后靶向释放出基因和药物，提高药物和基因转染率。研究表明，UTMD技术可向特定部位发射不同强度的超声波，当超声强度足够大时血液中的微泡便会发生破裂，破裂后的微泡产生微射流和冲击波，促使周围的血管壁或细胞膜表面出现可逆或不可逆的小孔，增加了血管或细胞膜的通透性，也增加了外源性物质到达特定部位的剂量，从而发挥其特有的生物学效应。其中，最主要的是空化效应，也是UTMD发挥作用的主要机制，UTMD诱导的空化效应又分为稳定空化和惯性空化，两种空化方式对细胞有不同的生物学改变。在稳定空化条件下，微泡的机械振动和体积变化不仅可以通过离子浓度改变细胞膜电位，还可以对细胞膜产生剪切力，刺激细胞内吞，从而促进跨细胞膜基因的转运；惯性空化也会引起细胞膜电位的变化，不仅可产生瞬时剪切力，还能对细胞产生强烈的冲击和热效应，破坏细胞膜的完整性。与稳定空化相比，惯性空化诱导了更大尺寸的膜孔形成，实现了大分子物质的转运。

为了进一步提高基因转染效率，国内外学者探索了UTMD与其他载体联合使用介导基因转染的方法。例如，UTMD与脂质体联用，脂质体是人工合成的双层磷脂囊泡，因其具有类细胞膜结构、高生物相容性、低免疫原性、能保护药物或活性基团、延长药物半衰期及增效减毒等优势，已成为有效传递活性生物化合物的一种有前途的载体。虽其具有转染效率低、表达时间短等缺点，但上述不足均可联合UTMD应用得到解决。研究表明，UTMD产生的空化效应是UTMD联合脂质体介导基因转染的主要机制，也是其提高脂质体转染效率的主要原因。UTMD与外泌体、聚合物胶束、病毒载体等联用也取得了一定的研究成果，为基因治疗提供了更多的选择和思路。

在反义磷酸受纳蛋白基因治疗心血管疾病方面，也有不少相关研究。心肌细胞的收缩和舒张与肌质网Ca2+的