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制药企业尿激酶生产技术标准

前言

尿激酶作为一种重要的蛋白水解酶类溶栓药物，在临床血栓性疾病治疗中占据着不可或缺的地位。其生产过程的规范性、科学性与严谨性，直接关系到药品的质量、安全性和有效性。本技术标准旨在为制药企业尿激酶的生产提供一套系统、全面的技术指导，确保生产过程可控，产品质量稳定均一，符合国家相关法规及药品标准要求。

一、范围

本标准规定了尿激酶生产过程中的原料控制、生产环境、关键工艺步骤、质量控制、包装储存及文件管理等方面的技术要求。

本标准适用于采用从人尿中提取纯化工艺生产尿激酶的制药企业。

二、术语与定义

1.尿激酶（Urokinase,UK）：由人尿中提取的一种能激活纤维蛋白溶酶原的酶类物质，主要成分为尿激酶型纤溶酶原激活剂，具有溶解血栓的生物活性。

2.原料尿：用于提取尿激酶的健康人尿液。

3.粗品：经初步提取分离得到的含有尿激酶的混合物。

4.精品：经纯化工艺处理后，达到特定质量标准的尿激酶产品。

5.效价：衡量尿激酶溶栓活性的指标，通常以国际单位（IU）表示。

6.层析：利用混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离纯化的技术。

三、生产技术要求

3.1原料收集与预处理

3.1.1原料尿收集

原料尿的收集应建立在符合伦理和卫生要求的基础上，由指定的、经过培训的人员负责。收集点应设置专用、清洁、带有盖的收集容器，材质应耐腐蚀、不与尿液成分发生反应。收集过程中应避免混入粪便、血液、洗涤剂等异物。鼓励提供尿液者保持良好的个人卫生习惯。

3.1.2原料尿储存与运输

收集的原料尿应及时在规定温度下冷藏保存，以抑制微生物生长和酶活性丧失。储存时间不宜过长，具体时限应通过验证确定。运输过程中需保持低温条件，防止尿液变质。运输车辆应定期清洁消毒。

3.1.3原料尿预处理

原料尿在进入提取工序前，需经过滤去除肉眼可见的杂质。必要时进行pH值调节、离心或其他预处理步骤，以改善后续提取效果。预处理过程应在规定的时间和温度条件下进行。

3.2提取纯化工艺

提取纯化工艺是尿激酶生产的核心环节，应根据经批准的工艺规程执行，确保过程稳定可控。关键工艺参数需进行严格监控。

3.2.1吸附与洗脱

可采用离子交换树脂等适宜的吸附剂对尿液中的尿激酶进行吸附。吸附条件（如流速、温度、pH值）应严格控制。吸附饱和后，选用合适的洗脱液进行洗脱，收集具有生物活性的洗脱峰。

3.2.2沉淀与分离

根据尿激酶的理化性质，可采用盐析、有机溶剂沉淀等方法进行初步纯化。沉淀过程中应注意搅拌速度、温度控制及试剂加入方式，以获得颗粒均匀、易于分离的沉淀物。离心或过滤分离沉淀时，应确保分离效果，减少目标物损失。

3.2.3层析纯化

为获得高纯度的尿激酶，通常需采用多种层析技术组合，如离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。每步层析的上样量、流速、洗脱液梯度、pH值、温度等关键参数应严格按照验证确定的范围执行。层析介质的活化、平衡、再生及保存应符合相关规定，确保其性能稳定。

3.2.4超滤与浓缩

采用适宜分子量截留值的超滤膜对层析后的尿激酶溶液进行浓缩和脱盐。超滤过程中应控制操作压力、温度、流速，防止膜污染和浓差极化，确保超滤效率和产品活性。

3.3制剂制备

若生产的是尿激酶制剂（如注射用尿激酶），则需在纯化后进行制剂配制、除菌过滤、灌装和冻干等步骤。

3.3.1配制与除菌

根据制剂处方，将尿激酶精品用适宜的缓冲液溶解，加入必要的辅料，调整pH值和浓度。配制完成后，应经0.22μm或更小孔径的滤膜进行除菌过滤。过滤前应进行完整性测试，过滤后应取样进行无菌检查。

3.3.2灌装与冻干

除菌后的药液应在洁净环境下及时灌装于无菌容器中。冻干过程的工艺参数（如预冻温度、时间，升华干燥温度、压力，解析干燥温度、时间等）应经过验证，确保冻干产品外观良好、含水量合格、复溶性能佳，且生物活性稳定。

3.4生产环境与设备

3.4.1生产环境

尿激酶生产车间的设计和布局应符合药品GMP要求，根据生产工艺的洁净度需求划分不同的洁净区域。洁净区的空气净化系统、温湿度控制、压差控制应符合规定，并定期监测。生产区、仓储区、检验区等应明确划分，防止交叉污染。

3.4.2生产设备

生产设备的设计、选型、安装应符合生产工艺要求，便于清洁、消毒和维护。与物料直接接触的设备表面应光滑、耐腐蚀、不脱落异物。关键设备（如层析柱、超滤系统、冻干机等）应进行验证和定期维护保养。设备清洁规程应明确，确保清洁效果，防止残留污染。

3.5质量控制

3.5.1中间产品控制

对生产过程中的关键中间产品（如洗脱液、沉淀物、各步层析产物、超滤浓缩液等）应建立相应的质量控制标准，包括但不限于效价、蛋白质含量、纯度、pH值、微生物限度等，并按规定进行取样检