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d)Vol.11No.S

Oct.1993

植物组织培养过程中克服基因型障碍的方法

号有兰

《北京市枪翎iffi胞工程实贬案100081)

植物生物技术是-?项高、新技术，其研究内容随着时代的发履也愈来愈丰富?从组织培养、细胞培奔，体细胞杂交等一直到DNA重组、基因转化和转基因植物的创造和应用。近几年来?末谷类作物的生物技术有了较大的突破,譬如小麦原生质体培养再生成苗?抗虫基因导入水稻赋与植株抗虫特性。这些实例证明了植物生物技术必将会对下一个世纪的农业生产产生深刻的影响.所以我们应该对植物生物技术的研究和发展给子更多的关注.

组织培养是植物生物技术研究的基础，如果离体的植物组织或细胞在人为控制的微环境条件下能够分化再生成完整的植株.这样的研究才最有意义.烟草的组织培养比较容易.所以它成为模式植物.研究得最为深入.原生质体培养和转基因植株的获得也都是用烟草作试验材料最先取得成功的。

从理论上讲.植物的组织和细胞具有全能性(totipotency),即每一个细胞都能在离体条件下培养成为一个新的个体.事实并非如此.实际上有不少种植物或同一种植物中不同的基因型，它们对组织培养的反应很差.很难在离体培养过程中顺利表达其全能性.实现植株的再生.通常我们把组织培养反应差的材料称之为顽拗性(recalcitrate).迄今对某些植物或某些植物的基因型顽拗性的原因并不清井.内在的原因可能是受到基因调控的影响,细胞雎以脱分化和再分化,或者是内源激素的状态不平衡为细胞分裂设下了障一28_碍；外在的原因可能是对离体培养的微环境有特殊的要求，如营养物质,光照、温度以及特殊的激素等.我们对这些特殊的要求不清楚,未能予以满足.所以细胞也难以分裂生长?

顽拗性使试脸材料的广泛利用受到了限制，在一定程度上影响了植物生物技术的研究和应用,是从事这项研究的科技工作者认为最棘手的一个问题.目前还没有找到克服顽拗性的有效措施,只是在试验过程中辅以各种方法，来提高组织培养的效果，降低顽拗性的影响,有些方法取得了比较满意的效果，可陟参考.笔者根据近两年来“AgrkellRjport”中介绍的有关材料，对当前在植物组织培养过程中克服基因型障碍的方法作一综述,以飨读者.

微生物方法

微生物与植物的相互关系是非常奥妙的,有些微生物在生长过程中会分泌出一些对植物生长?有刺激作用的物质.有些微生物还会直接在植物细胞中生存，构成互利的关系.在植物组织培养过程中.利用与微生物共培养的方法，使植物组织或细胞与微生物一起组成一个有利的微生态环境，可以起到改善蛆织培养的效果.

J.L.Ibave进行胡萝卜的细胞培养时，接入红球菌｛Rhadocacus｝与之共培养，结果细胞分化原率提高、形成的茎、根数量明显增加，叶片中叶绿素含量也有所提高.即使用培养红球菌的上清液加进培养基中也有较明显的效果.从共培养的培养基中分析出有异戊烯腺苛类的激素。

T.Matsunage用聚球藻(Synechococcus)、与胡萝卜的细胞共培养，能明显增加眨性细胞提高再生侬率H.Wake用念珠藻(Nostoe)鱼脱藻(Anabaena)异环藻(.Xeno-coccus)和聚球藻的热水提取物来堵养胡萝卜的悬浮细胞，都能使再生原率大大提高.聚球藻的热水提取物还能使培养了6年的蛇床(Cnidturnofficinale)的非胚性愈伤组织分化形成了胚。

Yang在研究大豆的组织培养时?把难以分化的茎、叶外植体与假单胞菌(P$e?domonas)共培养.结果形成了结节状愈伤组织，再生成绿苗，而且再生频率相当高.J?J.Germida在小麦根培养物中接入假单胞菌，也促使根和根毛的数量大大增加。

A.Smigocki用农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens｝与桃和苹果的愈伤组织进行共培养，即使培养基中不加激素，愈伤组织也能分化再生成小植株.经检测证明，农杆菌所特有的合成激素的基因在再生檀株中得以表达，说明在共培养过程中.农杆菌能进入愈伤组织，并导入了合成激索的基因.

物理方法

利用光、热、电、磁等物理因素对植物外植体直接产生刺激效应，可能会对细胞的分裂生长产生影响.收到良好的效果，但机理并不清楚.

光照

光的强度和质量对组织培养的影响是很明显的.A.Figueira在进行可可试管苗快繁时用强光C200Mmol/(m2-s)J配合高浓度的CO2(20000ppm)可以在不加蔗德的条件下使一些顽拗型的可可品种也能实现快繁.用山月桂作试验，也获得同样效果。L.Urban用马铃薯进行块茎组织培养时，用强