ANGPTL1在结直肠癌肝转移中的功能和机制研究.pdfVIP

浙江大学博士学位论文致谢

卜彤彤等师弟师妹的帮助，感谢你们为平淡的科研增添了无尽的欢乐，跟你们一

起做实验真的很开心。

感谢浙二肿瘤内科、放疗科、大肠外科、放射科医护在家父住院期间给予的

帮助和照顾。特别感谢袁瑛教授、翁姗姗老师、胡涵光老师、董彩霞老师、郑亚

萍老师、魏启春教授、张婷老师、王六红老师。

感谢我的室友刘天健、赵响得、汪正财。你们仨是我进入浙大最早认识的同

学。一起生活、学习、玩乐的时光总是特别难忘。希望未来我们在杭州还能常常

相聚。

最后，我要感谢我即将出世的孩子。因为有你，我的生活变得更加丰富多彩；

因为有你，我对未来有了更多期待！

II

浙江大学博士学位论文中文摘要

ANGPTL1在结直肠癌肝转移中

的功能和机制研究

浙江大学医学院肿瘤学

博士研究生蒋凯

导师丁克峰

中文摘要

研究背景

结直肠癌（ColorectalCancer,CRC）是最常见的消化道恶性肿瘤之一。肝转移

是CRC相关死亡的主要原因，目前缺乏有效的治疗手段，且机制未明。因此，探

索CRC肝转移的关键分子具有重要的临床意义。多项研究报道血管生成素类似蛋

白1（Angiopoietin-likeproteins,ANGPTL1）在肿瘤组织中表达下调，能够抑制肿

瘤细胞的转移能力。然而，ANGPTL1在CRC中的作用仍不清楚。因此本文将阐明

ANGPTL1在CRC中的表达情况及生物学功能，重点探究ANGPTL1对CRC肝转移的

作用及分子机制。

研究方法

首先，我们通过分析TCGA和GEO数据库及本中心组织样本的基因表达谱明

确ANGPTL1在CRC中的表达情况及其和患者预后的关系。然后，我们通过慢病

毒转染构建ANGPTL1过表达和敲低的CRC细胞，并通过细胞功能实验和小鼠皮

下成瘤及肝转移模型研究ANGPTL1对CRC细胞增殖、运动及转移能力的作用。

III

浙江大学博士学位论文中文摘要

接着，我们通过GEO数据库筛选了受ANGPTL1调控的miRNA，并利用miRNA

类似物和抑制剂探究ANGPTL1抑制CRC转移的分子机制。此外，有研究显示

ANGPTL1能够以外泌体的形式分泌，因此我们进一步探究外泌体ANGPTL1对

CRC的作用和机制。我们首先通过超速离心法分离了CRC组织来源的外泌体，并

使用Westernblot（WB）检测了外泌体ANGPTL1蛋白的表达情况。然后，我们利

用ANGPTL1过表达的CRC细胞获得携带高水平ANGPTL1的外泌体，并且通过

小鼠眼球后注射实现外泌体教育。接着，我们借助经脾肝转移模型和体内血管渗

漏实验研究外泌体ANGPTL1对CRC肝转移及转移前微环境（Pre-metastaticNiches,

PMNs）的影响。最后，我们通过转录组测序探索外泌体ANGPTL1对Kupffer细

胞（KCs