BIN1通过自噬_溶酶体途径介导tau蛋白降解在阿尔兹海默病中的作用机制.pdfVIP

BIN1通过自噬/溶酶体途径介导tau蛋白降解在

阿尔兹海默病中的机制

浙江大学医学院神经病学

硕士研究生高培榕

导师李红蕾

中文摘要

背景：阿尔兹海默病（Alzheimer’sDisease，AD）是最常见的一种神经退行性疾

病，它的典型病理是老年斑和神经元纤维缠结。AD根据临床表现可以分为家族性

AD（familialAlzheimer’sDisease，FAD）和散发性AD（sporadicAlzheimer’sDisease,

SAD），并且其中SAD占绝大部分。随着遗传学的发展，桥联整合蛋白基因（Bridging

integrator1，BIN1）逐渐被认为是AD中仅次于APOE的第二大易感基因。在机制

研究方面，既往的研究普遍认为，BIN1通过干扰β-分泌酶（β-siteAPP-cleaving

enzyme，BACE1）的内体转运途径进而干扰了淀粉样前体蛋白（Amyloidprecursor

protein，APP）的蛋白水解途径，进而影响了β淀粉样蛋白（βAmyloidprotein，Aβ）

病理。到目前为止，大多数针对BIN1在AD中的机制研究都集中淀粉样斑块病理

方面，有关于tau病理机制研究很少。

目的：本研究的主要目的为了探究BIN1对tau病理的作用及具体机制。

方法：首先，我们选取了2017年5月到2019年4月在浙江大学医院就诊，并且

诊断为AD的19名患者，进行BIN1的表达和脑脊液病理之间的相关性分析。然

后通过细胞功能实验，再一次验证BIN1对于tau病理的作用以及探究其中的具体

机制。

II

结果：在这项研究中，我们发现AD患者外周血中BIN1mRNA水平和脑脊液

Aβ42/t-tau、t-tau之间均存在相关性。为了验证BIN1在tau病理中的作用，我们进

行了细胞功能实验探究其中的具体机制。我们首先构建了广泛型BIN1和神经型

BIN1质粒，MAPT质粒为实验室现有保种。然后我们在体外细胞转染实验中发现，

在过表达广泛型BIN1的细胞中总tau含量下降，同时tau蛋白的ser396和ser404

位点磷酸化水平下降以及细胞内tau蛋白寡聚体形成减少。但是，我们利用细胞免

疫荧光和Westernblot计算乙酰化tubulin/总tubulin比值发现，三组细胞中tau和

微管结合未受到影响。为了探究细胞内tau蛋白水平下调的具体机制，我们首先通

过实时荧光定量PCR的方法证明了广泛型BIN1不影响MAPTmRNA水平。随后

我们又探究了BIN1对于tau蛋白自噬/溶酶体途径的影响，结果表明在广泛型BIN1

过表达的细胞中LC3II/I比值升高、p62水平降低。而当我们使用溶酶体抑制剂

NH4Cl抑制自噬-溶酶体途径后，tau蛋白水平再次升高。

结论：BIN1通过影响自噬/溶酶体途径影响tau病理。

关键词：阿尔兹海默病（AD），桥联整合蛋白（BIN1），tau病理，自噬/溶酶体

途径

III

ThemechanismoftaudegradationmediatedbyBIN1

throughautophagy/lysosomalpathwayinAD

DepartmentofNeurology

SchoolofMedicine，ZhejiangUniversity

Postgraduate:Pei-Ron