BTLA-HVEM免疫检验点对鱼类T细胞活化的调节功能研究.pdfVIP

摘要

BTLA和HVEM是哺乳动物中一对特征明确的免疫检验点分子。然而，目

前人们对它们在非哺乳动物物种中的功能仍知之甚少。论文的第一部分以大黄鱼

为研究模型，鉴定了大黄鱼(Larimichthyscrocea)的BTLA和HVEM分子

（LcBTLA和LcHVEM）。LcBTLA和LcHVEM与哺乳动物的BTLA和HVEM

同源分子具有相同的保守结构域，并且在不同的组织和细胞中的转录水平不尽相

同，其中，在免疫相关组织和脾脏白细胞中相对丰富。免疫荧光染色和流式细胞

分析显示LcHVEM和LcBTLA蛋白分布在MHC-II+APCs和CD4+T细胞上。免

疫共沉淀Co-IP分析显示LcBTLA和LcHVEM之间有很强的相互作用。利用混

合淋巴细胞反应(MLR)和抗原特异性CD4+T细胞体外增殖活化试验，并结合

使用抗LcBTLA和抗LcHVEM抗体以及不同组合的重组可溶性LcBTLA和

LcHVEM蛋白（sLcBTLA和sLcHVEM）进行阻断分析，发现LcBTLA-LcHVEM

相互作用对同种异体反应性T细胞的激活以及抗原(嗜水气单胞菌Aeromonas

hydrophila)特异性CD4++TT细胞细胞的增殖活化发挥的增殖活化发挥抑制抑制性调节性调节作用。这些结果作用。这些结果揭示揭示

了了LcLcBTLABTLA和和LcLcHVEMHVEM免疫免疫检验点检验点分子分子在在鱼类鱼类同种异体同种异体TT细胞反应和细胞反应和CD4CD4++TT

细胞介导的细胞介导的抗感染免疫抗感染免疫反应中的广泛作用。因此，反应中的广泛作用。因此，BTLABTLA--HVEMHVEM检验点检验点可能代表可能代表

了一种古老的共抑制途径，了一种古老的共抑制途径，该途径在该途径在鱼类鱼类中已经起源中已经起源，并在整个脊椎动物进化过，并在整个脊椎动物进化过

程中程中被选择性被选择性保保留留了了下来。下来。

论文的第二部分以斑马鱼为研究模型，论文的第二部分以斑马鱼为研究模型，研究研究BTLABTLA在调节斑马鱼抗病毒免在调节斑马鱼抗病毒免

疫中的作用。研究发现，疫中的作用。研究发现，SVCVSVCV感染感染斑马鱼后，斑马鱼后，BTLABTLA的表达在短时间内迅速上的表达在短时间内迅速上

调，调，HVEMHVEM的表达没有明显变化。的表达没有明显变化。随后，随后，我们连续三天向斑马鱼腹腔注射我们连续三天向斑马鱼腹腔注射抗抗BTLABTLA

抗体抗体，，再用再用SVCVSVCV感染斑马鱼感染斑马鱼，，结果发现结果发现CD8CD8++细胞比例明显增加细胞比例明显增加LcHVEM，，同时同时IFNγ，

相互作用对同种异体Fasl等细胞因子的水平也显著上调，说明反应性T细胞的激活以及抗原(嗜水气单胞菌BTLA可能负调控斑马鱼的抗病毒免疫Aeromonas

hydrophila)特异性反应CD4。为了进一步验证，我们用BTLA的干扰RNA对斑马鱼BTLA进行敲低，

++

然后用SVCV感染斑马鱼，结果发现，敲低组的CD8TT细胞细胞比例比例显著增加显著增加，，IFNIFNγγ，，

FaslFasl等细胞因子的水平也显著上调，等细胞因子的水平也显著上调，这这与抗体封闭试验结果一致，说明