牛羊炭疽病诊断技术.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMAxxx—2025

牛羊炭疽病诊断技术

Diagnostictechniquesforcattlesandsheepanthraxdisease

征求意见稿

2025-x-xx发布2025-x-xx实施

中国兽医协会发布

T/CVMAxxx—2025

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国兽医协会提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

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II

引言

炭疽（Anthrax）是由炭疽杆菌引起的一种急性、热性、败血性人兽共患传染病。自然宿主包括草食性野生动物（野牛、羚羊等）和家畜（牛、羊等）。牛羊炭疽具有天然孔出血、血液呈煤焦油样凝固不良、皮下及浆膜下结蹄组织出血性浸润、脾脏显著肿大等主要病变特征，具有发病快，死亡快，对人畜危害大的特点。世界动物卫生组织（WOAH）将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。准确诊断是牛羊炭疽防控最重要的环节之一，当前我国动物炭疽诊断技术暂无针对牛羊炭疽病诊断方面的血清学方法标准中无任何血清学抗体检测技术方面的介绍。伴随畜牧养殖业快速发展和进出口贸易加速，检疫检测任务日益繁重，原有标准受当时知识和技术条件所限，其内容已不能很好满足动物炭疽诊断和检疫检测的广泛需求，迫切需要建立新的诊断技术标准，特别要及时建立高通量敏感特异的成熟ELISA抗体检测技术，以便临床兽医、检验检疫工作者及时准确做好诊断，科学高效地进行疫情处置牛羊炭疽病。

养殖中，牛羊炭疽病严重危害畜牧业的健康发展。牛羊炭疽病的临床症状易与破伤风感染，饲料霉菌中毒，腐败梭菌和诺维氏梭菌感染相混淆，应当进行实验室鉴别诊断。

本文件中的PCR检测方法、实时荧光PCR检测方法适用于检测炭疽芽孢杆菌核酸；酶联免疫吸附试验适用于检测牛羊血清样品中的病原抗体。

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牛羊炭疽病诊断技术

1范围

本文件规定了牛羊炭疽病的临床诊断、病原分离与鉴定、PCR检测方法、实时荧光PCR检测方法、酶联免疫吸附试验的技术要求。

本文件适用于牛羊炭疽病的临床诊断、实验室检测、流行病学调查以及检验检疫。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Anthrax：炭疽

BHQ1：淬灭剂（BlackHoleQuencher?)

Ct值：在荧光定量PCR反应中，每个反应管中荧光信号量达到所设定的阈值经历的循环数（Cyclethreshold）

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

FAM：6-羧基荧光素（6-carboxy-fluorescein）

OD：光密度（Opticaldensity）

PBS：磷酸盐缓冲液(Phosphatebufferedsaline)

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

qPCR：实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePolymeraseChainReaction）

Taq：水生栖热菌（Thermusaquaticus）

5样品采集、运输与保存

警示—对本病剖检采样过程中应防止病原微生物扩散和感染。相关操作应符合GB19489和NY/T

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541的规定。

5.1试剂

5.1.1保护液，配制方法按照附录A的A.1。

5.1.2平衡盐溶液，配制方法按照A.2。

5.2采样工具

5.2.1器械:解剖刀、剪刀、镊子、注射器及针头。

5.2.2容器:带螺帽容器、灭菌塑料袋。

5.2.3个人防护用具:防护服、防护镜、防护帽、防护靴、口罩。

5.2.4采样记录用品:采样单、记号笔、防水标签等。

5.2.5其他:无菌棉拭子、医用棉签、医用