密闭式猪舍空气过滤器对病原拦截效果评估检测方法.docxVIP

ICS

CCS

团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

密闭式猪舍空气过滤器对病原拦截效果评估检测方法

TestMethodforEvaluatingPathogenInterceptionEfficiencyofAirFiltersinConfinedSwineHousing

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

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I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任

本文件由牧原食品股份有限公司提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

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1

密闭式猪舍空气过滤器对病原拦截效果评估检测方法

1范围

本文件规定了亚高效过滤猪舍过滤器上游和下游病原采集步骤及检测方法。

本标准适用于密闭式猪舍空气过滤器病原拦截效果的检测评估。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T18801

空气净化器

GB/T18641

伪狂犬病诊断方法

GB19489

实验室生物安全通用要求

GB/T27401

实验室质量控制规范动物检疫

GB/T35911

伪狂犬病病毒荧光PCR检测方法

GB/T38517

颗粒生物气溶胶采样和分析通则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

密闭式猪舍enclosedpigbarn

是指通过墙体、屋顶等外围护结构形成封闭状态的畜禽舍形式，其特点是与外界自然环境完全隔绝，舍内环境由人工调控。这种猪舍通常由高度自动化设备控制人工小气候条件，以提供适宜的环境条件

3.2

亚高效过滤器Sub-HighEfficiencyParticulateAir(Sub-HEPA)Filter

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2

用于猪舍通风系统，对粒径≥0.5μm额定风量下效率不低于90%的空气过滤器。

3.3

气溶胶发生器aerosolgenerator

能发生特定浓度和粒径分布的、稳定的气溶胶发生装置。

4符号和缩略语

下列缩略语适用于本文件：

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）。

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebufferedsalinebuffer）。

ABSL：动物生物安全防护实验室（Animalbiosafetylaboratory）。

PK-15：猪肾细胞系（PorcineKidney-15）

5猪伪狂犬病毒悬液制备

5.1仪器、耗材、试剂

5.1.1仪器

二氧化碳培养箱、生物安全柜、微量移液器

5.1.2耗材

细胞培养瓶、96孔细胞培养板、吸管、移液器吸头

5.1.3试剂

除特别规定外，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682的要求。

无菌水、DMEM培养液、0.25%胰酶、PK-15细胞、伪狂犬病病毒（野毒）、PBS缓冲液。

5.2操作步骤

5.2.1病毒培养和收获

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3

按照GB/T18641.3的相关要求和操作步骤进行病毒的培养和收获。

5.2.2病毒效价测定

按照GB/T18641.3的相关要求和操作步骤进行病毒的效价测定。

6病毒气溶胶生成

启动气溶胶发生器并保持稳定工作，将病毒悬液雾化成粒径分布可控的气溶胶颗粒，并稳定地分布在猪舍亚高效过滤器的上游。

7采样与鉴定

7.1设备、试剂、耗材

7.1.1设备

撞击式空气微生物采样器（常州康华KHW-6型六级筛孔）、荧光定量PCR仪

7.1.2试剂

除特别规定外，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682的要求。

DNA提取试剂、生理盐水、PCR扩增试剂盒，包含DNA聚合酶、缓冲液和dNTP混合物、PBS缓冲液。

7.1.3耗材

200PCR管、200uL八连管、移液器吸头、EP管

7.2样品的采集

7.