口蹄疫疫苗抗原定量ELISA检测方法.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

口蹄疫疫苗抗原定量ELISA检测方法

ELISAMethodsforQuantitativeDetectionofAntigensofFoot-and-MouthDisease

Vaccines

征求意见稿

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

XX/TXXXXX—XXXX

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件涉及专利。

本文件由中国农业科学院兰州兽医研究所提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

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2

口蹄疫疫苗抗原定量ELISA检测技术要求

1范围

本标准规定了O型和A型口蹄疫疫苗抗原定量ELISA检测技术要求。

标准适用于O型和A型口蹄疫灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗中抗原的定量检测，涉及的疫苗株包括：O/MYA98/XJ18、O/MYA98/JSCZ/2013、O/MYA98/BY/2010、O/PanAsia/HB/HK/99、OHM/02及O/PanAsia/TZ/2011。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T18935-2018口蹄疫诊断技术

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T33087仪器分析用高纯水规格及试验方法

WS375.19-2016疫病控制基本数据集第19部分：疫苗管理

GA1802.3-2022生物安全领域放恐怖防控要求第3部分：高生物安全风险疫苗生产单位

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

FMD：口蹄疫（Foot-and-MouthDisease）

FMDV：口蹄疫病毒（Foot-and-MouthDiseaseVirus）

ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）

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3

BSA：牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline）

Ab1：O型FMDV特异性抗体（O-typeFMDV-specificantibody）

Ab2：O型FMDV特异性光谱抗体（O-typeFMDV-specificspectralantibody）

HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase）

TMB：四甲基乙二胺联苯胺（3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine）

OD450nm：450nm波长处的吸光值（Absorbanceat450nm）

5试剂

O型FMDV灭活抗原，见附录A。

O型FMDV146S抗原特异性抗体Ab1，见附录B1。

O型FMDV146S抗原特异性广谱抗体Ab2，见附录B1。

生物素化标记Ab2抗体，见附录B2。

阳性质控抗原和阴性对照，见附录C。

包被缓冲液，见附录D1。

封闭液，见附录D2。

PBS，见附录D3

PBST稀释液，见附录D4。

25×浓缩洗涤液，见附录D5。

TMB底物显色液，见附录D6。

终止液，见附录D7。

6试验原理

在酶标板上包被抗O型FMDV146S抗原特异性纳米抗体（Ab1）作为捕获抗体，基于抗原抗体特异结合原理，加入待检抗原样品孵育，洗去多余抗原后，加入生物素标记的抗O型FMDV146S抗原特异性纳米抗体Ab2（BioAb2）与其进行结合，当待检抗原中存在O型FMDV抗原，则会形成抗体-抗原-抗体的“夹心”结构，洗去多余抗体后，加入HRP标记链霉亲和素。洗涤后加入四甲基乙二胺联苯胺（TMB）底物后显色，显色强度与样本中的O型FMDV抗原浓度成正相关；当待检样本中无O型

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4

FMDV抗原，待检抗原不能与捕获抗体结合，加入底物后不显色；根据测定