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解析菊花‘优香’中CmBBX13与CmBBX15基因：克隆技术与功能探究

一、引言

1.1研究背景与意义

菊花（ChrysanthemummorifoliumRamat.）作为世界四大切花之一，不仅是我国十大传统名花，更在花卉产业中占据着举足轻重的地位。其丰富多样的花型、花色以及悠长的花期，使之深受人们的喜爱，广泛应用于园林景观布置、切花生产以及盆栽观赏等领域。菊花‘优香’作为菊花中的一个重要品种，凭借花头大、花型规整、花期长、茎干挺直、叶片平展、抗病性强和耐贮藏等诸多优良特性，在切花市场中备受青睐，特别是在7-8月的高温季节，当其他花卉品种易受高温影响而导致花型变形、商品价值降低时，‘优香’菊花却能保持良好的性状，成为该时期花展菊的主要品种，具有极高的商业价值和市场前景。

植物的生长发育过程受到众多基因的精准调控，基因克隆与功能研究对于深入了解植物的生长发育机制、改良植物品种具有至关重要的意义。BBX（B-box）基因家族作为一类高度保守的转录因子，在植物的生长发育进程中发挥着不可或缺的作用，涉及光信号转导、生物钟调控、开花时间调节、逆境响应以及激素信号传导等多个生理过程。在菊花的生长发育过程中，BBX基因家族同样参与其中，影响着菊花的花期、花型、花色以及抗逆性等重要性状。

CmBBX13和CmBBX15基因作为BBX基因家族的成员，在菊花的生长发育中极有可能扮演着关键角色。通过对这两个基因进行克隆与功能研究，我们能够深入探究它们在菊花生长发育过程中的作用机制，为菊花的分子育种提供坚实的理论基础。一方面，这有助于我们更好地理解菊花的开花机制，从而通过调控相关基因的表达来实现对菊花花期的精准调控，满足市场对不同花期菊花的需求；另一方面，对这两个基因功能的深入了解，能够为菊花的遗传改良提供新的基因资源和靶点，通过基因工程技术将优良基因导入菊花品种中，培育出具有更优性状的新品种，如更美观的花型、更鲜艳的花色、更强的抗逆性等，进一步提升菊花的观赏价值和经济价值，推动菊花产业的可持续发展。

1.2国内外研究现状

近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，菊花基因克隆与功能研究取得了显著进展。国内外众多学者围绕菊花的生长发育、抗逆性、花色形成等重要性状，对相关基因进行了深入研究。在生长发育相关基因研究方面，已经成功克隆并鉴定了多个参与菊花花芽分化、开花时间调控的基因，如FT（FLOWERINGLOCUST）、SOC1（SUPPRESSOROFOVEREXPRESSIONOFCONSTANS1）等基因，揭示了它们在菊花开花调控网络中的作用机制。在抗逆性相关基因研究中，克隆了一系列与菊花抗旱、抗寒、抗病等相关的基因，如DgPIP1和DgPIP2（水通道蛋白基因）、DgNAC2及DgNAC3（NAC转录因子基因）等，通过功能验证明确了这些基因在提高菊花抗逆性方面的重要作用。

在BBX基因家族研究领域，虽然在拟南芥、水稻、番茄等模式植物中对BBX基因家族的功能研究较为深入，但在菊花中的研究相对较少。目前，已在菊花中鉴定出多个BBX基因家族成员，并对部分基因的功能进行了初步探索。例如，对菊花CmBBX7基因的研究发现，该基因在菊花的生长发育和环境胁迫响应中发挥着重要作用，通过对不同发育时期、不同环境条件下菊花CmBBX7基因的表达水平进行实时荧光定量PCR分析，揭示了其在生长发育、环境胁迫响应等方面的生物功能，同时利用基因编辑技术对CmBBX7基因进行敲除实验，进一步深入了解了该基因在菊花中的作用机制。然而，对于菊花CmBBX13和CmBBX15基因的研究尚处于起步阶段，国内外关于这两个基因的报道相对较少，对它们的基因结构、表达模式、生物学功能以及调控机制等方面的了解还十分有限。因此，开展菊花CmBBX13和CmBBX15基因的克隆与功能研究具有重要的理论意义和实践价值，有望填补该领域的研究空白，为菊花的遗传改良和分子育种提供新的思路和方法。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入探究菊花‘优香’中CmBBX13和CmBBX15基因的功能，为菊花的分子育种和花期调控提供理论依据和基因资源。具体研究内容如下：

菊花‘优香’CmBBX13和CmBBX15基因的克隆：以菊花‘优香’为材料，提取其总RNA并反转录为cDNA。根据NCBI数据库中已公布的菊花相关基因序列，设计特异性引物，通过PCR技术扩增CmBBX13和CmBBX15基因的全长CDS序列。将扩增得到的目的基因片段连接到克隆载体上，转化大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆并进行测序验证，确保获得准确的基因序列。

CmBBX13和CmBBX15基因的表达