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免疫检验技术分享

演讲人：

日期:

01

技术概述

02

核心检测方法

03

临床应用领域

04

技术优势与挑战

05

实验操作规程

06

未来发展趋势

目录

CATALOGUE

技术概述

01

PART

定义与基本原理

免疫检验技术定义

信号放大与检测机制

抗原-抗体反应原理

免疫检验技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过检测样本中的抗原或抗体来诊断疾病、监测免疫状态或研究生物分子的技术。其核心是抗原-抗体反应的高度特异性和敏感性。

抗原与抗体通过非共价键（如氢键、疏水作用等）结合，形成稳定的免疫复合物。这种结合具有高度特异性，类似“锁钥”关系，可用于定性或定量分析目标分子。

通过酶联、荧光、化学发光等标记技术放大抗原-抗体结合信号，提高检测灵敏度。例如，酶联免疫吸附试验（ELISA）利用酶催化底物显色反应实现信号可视化。

发展历史回顾

早期免疫学奠基（19世纪末-20世纪初）

以PaulEhrlich的“侧链理论”和EmilvonBehring的血清疗法为代表，奠定了抗原-抗体反应的理论基础。此阶段主要采用凝集试验和沉淀试验等简单方法。

现代技术多元化发展（21世纪以来）

流式细胞术、化学发光免疫分析（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）等技术的成熟，实现了高通量、自动化和多指标联合检测。

标记技术革命（20世纪中叶）

放射性同位素标记（如RIA，1959年）和酶标记技术（如ELISA，1971年）的发明大幅提升检测灵敏度，推动免疫检验进入定量时代。

主要分类体系

按标记物类型分类

包括酶免疫分析（如ELISA）、荧光免疫分析（如FIA）、化学发光免疫分析（CLIA）、放射性免疫分析（RIA）等，不同标记物直接影响检测灵敏度和操作复杂度。

按反应相态分类

分为均相免疫分析（如荧光偏振免疫分析）和非均相免疫分析（如ELISA），前者无需分离步骤，后者需通过洗涤去除未结合物质以提高特异性。

按检测目标分类

涵盖抗体检测（如传染病血清学诊断）、抗原检测（如肿瘤标志物筛查）、半抗原检测（如药物浓度监测）及细胞免疫检测（如流式细胞术分析淋巴细胞亚群）。

核心检测方法

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PART

ELISA技术原理

抗原抗体特异性结合

ELISA（酶联免疫吸附试验）基于抗原与抗体的高度特异性结合，通过酶标记抗体或抗原，利用酶催化底物显色反应实现定量或定性检测。

间接法与夹心法分类

间接法用于检测抗体，先将已知抗原包被于固相载体；夹心法则用于检测抗原，需使用两种特异性抗体分别作为捕获抗体和检测抗体。

灵敏度与高通量优势

ELISA可检测pg/mL级微量物质，且96孔板设计支持批量样本检测，适用于大规模筛查如传染病血清学诊断或肿瘤标志物分析。

显色系统选择

常用辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）作为标记酶，对应TMB或PNPP等底物，通过分光光度计测定吸光度值定量分析。

免疫荧光法应用

广泛应用于自身免疫病（如抗核抗体检测）、病原体感染（如呼吸道合胞病毒）的快速诊断，通过荧光显微镜观察特异性荧光信号分布。

组织病理学诊断

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采用镧系元素螯合物标记，通过延迟测量消除背景荧光干扰，显著提升信噪比，适用于超微量物质（如激素）检测。

时间分辨荧光技术

直接法将荧光素标记一抗，操作简便但灵敏度低；间接法标记二抗，通过信号放大显著提高检测灵敏度，适用于低丰度靶标定位。

直接与间接标记技术

结合荧光标记抗体与流式细胞仪，实现细胞表面标志物（如CD分子）的多参数分析，在白血病分型、免疫细胞亚群检测中发挥关键作用。

流式细胞术联用

利用125I等放射性同位素标记抗原或抗体，可检测fg/mL级物质，至今仍是部分激素（如胰岛素）检测的金标准。

同位素标记高灵敏度

需配备放射性实验室、铅屏蔽设备及废物处理系统，操作人员需接受辐射安全培训并定期监测受照剂量。

严格防护要求

样本中待测抗原与标记抗原竞争结合限量抗体，通过测定沉淀物放射性强度，绘制标准曲线计算待测物浓度。

竞争结合反应原理

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放射免疫测定特点

尽管灵敏度极高，但因放射性危害及半衰期限制，逐渐被化学发光免疫分析等非同位素技术替代，但在某些特殊项目（如PTH检测）中仍不可替代。

自动化替代趋势

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临床应用领域

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PART

疾病诊断案例

感染性疾病检测

免疫检验技术广泛应用于病毒、细菌等病原体的检测，如通过ELISA或化学发光法检测特定抗体或抗原，快速识别感染源并辅助临床诊断。

自身免疫疾病筛查

利用免疫印迹或流式细胞术检测自身抗体，帮助诊断类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等疾病，为早期干预提供依据。

肿瘤标志物分析

通过免疫组化或液相芯片技术定量分析AFP、CEA等肿瘤标志物，辅助癌症的早期发现、分型及疗效