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一、原理与方法

免疫组织与细胞化学检验（Immunohistochemistryandimmunocytochemistryexamination）是利用免疫学原理，将抗原抗体反应应用与组织细胞化学而深入经过级连放大，增加敏感性。最终用辣根过氧化物酶显色。从而定位组织细胞中抗原（蛋白多肽、酶）等各种基因产物特异方法。

在病理学外检工作中可用于对不一样起源，HE难以诊疗肿瘤进行确诊和判别诊疗。

其基本原理是应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合物”化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）技术。

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Esophagealcarcinoma

E-cad+inmembrane

WuMing-Yaoetal.

GFAP+incytoplasmofneurogliacell.TianDong-Ping,SuMinetal.

Fos+innucleus

Immunohistochemistry

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尖锐湿疣HPVIHC×200郭煜

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原位癌IHC×400

胡彬

MCM2

Ki67

PCNA

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左）Ii（200/400）

右）HLA-DR（200/400）

双标染色结果

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双标染色

Ii（400）

DR（400）

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二、免疫组织化学技术主要步骤与惯用标识物

（一）主要步骤

1．提取抗原(免疫原Immuno-gen);

2．用免疫原免疫动物(兔)制备抗血清(多克隆抗体)或免疫动物(鼠)后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；

3．纯化抗体；

4．抗体标识组织切片；

5．染色反应；

6．观察结果。

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（二）惯用标识物

1．酶为最惯用标识物。作为标识酶应含有以下条件：①底物是特异性，且易于显示；②酶反应产物稳定，不易扩散；③轻易取得纯酶分子且较稳定；④酶标识抗体后，不影响二者活性；⑤被检组织中不应存在内源性相同酶或其底物。惯用标识酶有辣根过氧化物酶（HRP）、硷性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。

2．荧光素指在高能量光波激发下能产生荧光物质。惯用有异硫氰酸荧光素（FITC）、四甲基异硫氰酸罗达明（TRITC）。

3．生物素其与卵白素亲和力显著高于抗原抗体结协力。

4．金属标识物如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。

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三．惯用免疫组织化学染色方法

（一）直接法

将荧光素(免疫荧光法)或酶直接标识在第一抗体上，以检验对应抗原。直接法含有特异性强优点，但敏感性差，花费抗体多。

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（二）间接法

先用荧光素或酶标识第二抗体，一抗为特异性抗体，二抗仅有种族特异性。

特点:⑴预先标好二抗，较方便；

⑵比直接法敏感，但仍差。

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（三）PAP法与双PAP法：

既过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法(PerixidaseAntiperoxidaseComplexMethod,PAP)

先将过氧化物酶（HRP）免疫兔/羊/鼠，制成兔/羊/鼠抗ＨＲＰ；然后再与ＨＲＰ结合，形成一个稳定多角形结构（PAP）。

特点：⑴敏感性较高；

⑵背景染色低（相对）；

⑶双PAP敏感性更高，但背景相对较重。

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（四）ABC法：1981年美籍华人许世明创造了ABC法Vector

既卵白素－生物素过氧化物酶复合物法(AvidinBiotin-peroxidaseComplex,ABC)

利用卵白素与生物素特有高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素化HRP，再以生物素化HRP与卵白素按一定百分比混合，形成一个复合物；同时先将二抗生物素化。

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１．如将卵白素换成链霉亲和素，则为：

ＳＡＢＣ法：(StreptAvidinBiotin-peroxidaseComplex)

２．将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：

ＬＳＡＢ法：labelledStreptAvidin-Biotin

３．用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：

Ｓ－Ｐ法：(StreptAvidinPer