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灭活剂保护剂和免疫佐剂;二、常见灭活剂灭活机理与应用

(一)灭活剂种类

1、甲醛溶液：

①蛋白质②核酸烷基化（不加中止剂）

2、烷化剂

乙酰基乙烯亚胺（AEI）

二乙烯亚胺(BEI)

缩水甘油醛

（使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代硫酸钠中止灭活）

3、苯酚（石炭酸）：用于防腐，极少用于疫苗研制

4、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂）

用于诊疗抗原制备：鸡白痢抗原

5、β-丙酰内酯

病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用.

注意：灭活剂对人有害，有时对皮肤粘膜有强烈刺

激性如：甲醛、β-丙酰内酯;甲醛溶液：

《规程》（）中26种灭活疫苗

灭活机理：

灭活浓度：多数为0.1％～0.3％

灭活标准：低浓度、短时间而又能到达彻底灭活目标；

必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠，以中止其反应。;烷化剂（alkylatingagent）

乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI)、缩水甘油醛

灭活机制：

1.烷化DNA分子中鸟嘌呤或腺嘌呤等，引发单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA结构而破坏其功效，妨碍RNA合成，从而抑制细胞有丝分裂。

2.与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。

优点：能破坏病毒核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而

不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。;1、乙酰基乙烯亚胺（N-acetylethylenimine，AEI）

淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。

0～4℃可保留1年，在-20℃可保留2年

AEI功效基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。

口蹄疫病毒液:终浓度0.05％，30℃8h,加2％硫代硫酸钠阻断

2、二乙烯亚胺（binaryethylenimine，BEI）

市购商品为0.2％BEI溶液，在0～4℃可保留1个月;

终浓度0.02%,加入2％硫代硫酸钠中止灭活。

;3、缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA）

大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。

本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。

0～4℃3个月含量渐下降，约六个月失效；20℃只能保留10d。

4、?-丙酰内酯（?－propiolactone）又名羟基丙酸-?-内酯

无色有刺激气味液体，水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保留

水中溶解度37％，能与丙酮、醚和氯仿任意混合

对皮肤、粘膜及眼有强刺激性，对动物有致癌性。

病毒灭活后，能保持良好免疫原性

主要用于狂犬病灭活疫苗制备。

;三、影响灭活作用原因

1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛最常见。

2、微生物种类和特征

3、灭活剂浓度（一定要适合）

4、灭活温度（详细不一样病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致）

5、灭活时间

6、灭活PH值

7、有机物存在;第二节保护剂（稳定剂）

保护剂：又称稳定剂（stabilizer），是指一类能预防生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏物质。（指对疫苗生产、血清制备等）

保护剂用途（不一样用途加不一样保护剂,主要针对活微生物或细胞）

①菌种或毒种保留：常见甘油作保护剂

②细胞株保留：常见二甲基亚砜(DMSO)

DMSO:二甲基亚砜，一个细胞保护剂

③疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚

砜）和蔗糖等（不一样国家有不一样配方）

④干扰素类生物活性物质保留：加葡聚糖

;保护剂（protector）分类;

?

复合物脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等

糖类蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等

盐类乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等

醇类山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等

酸类柠檬酸、酒石酸、氨基酸等

聚合物葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等

;疫苗冻干保护剂组成

1.营养液：

可修复因冻干而受损细胞，使冻干制品含有一定量水分；

可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔海绵状，

增加溶解度

2.赋形剂：

预防低分子物质碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响

使冻干制品形成多孔性、疏松海绵状物，增加