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pcr上岗证培训试题和答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.聚合酶链式反应（PCR）技术的基本原理模仿的是以下哪种生物过程？

A.原核生物DNA复制

B.真核生物RNA转录

C.病毒逆转录

D.噬菌体DNA整合

答案：A

解析：PCR技术通过高温变性、低温退火、适温延伸的循环过程，模拟了生物体内DNA半保留复制的基本原理，核心是依赖DNA聚合酶的链式扩增反应。

2.以下哪种酶是常规PCR反应中最关键的酶？

A.逆转录酶（RT）

B.TaqDNA聚合酶

C.限制性内切酶

D.DNA连接酶

答案：B

解析：TaqDNA聚合酶具有热稳定性，能在95℃高温下保持活性，是PCR循环中延伸步骤的核心酶。逆转录酶用于RT-PCR，其他酶不直接参与扩增。

3.PCR反应体系中，dNTP的主要作用是？

A.提供反应缓冲环境

B.作为DNA合成的原料

C.稳定引物与模板结合

D.激活聚合酶活性

答案：B

解析：dNTP（脱氧核苷酸三磷酸）是DNA链延伸的基本原料，在聚合酶作用下，其α-磷酸基团与前一个核苷酸的3-OH形成磷酸二酯键，完成链的延长。

4.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用机制是？

A.特异性结合双链DNA小沟区

B.与引物5端荧光基团发生FRET

C.嵌入双链DNA碱基对之间

D.标记探针3端淬灭基团

答案：C

解析：SYBRGreenI是一种非特异性荧光染料，通过嵌入双链DNA的碱基对之间发出荧光，荧光强度与扩增产物量成正比，可用于实时监测扩增过程。

5.PCR实验室分区中，以下哪个区域必须设置为负压环境？

A.试剂准备区

B.样本处理区

C.扩增区

D.产物分析区

答案：B

解析：样本处理区（核酸提取区）是最易产生气溶胶污染的区域，需设置为负压（相对于其他区域），防止含核酸的气溶胶扩散到其他清洁区。

6.进行PCR实验时，若引物设计存在严重二聚体，最可能导致的结果是？

A.扩增产物量显著增加

B.非特异性扩增条带

C.Ct值提前

D.熔解曲线出现单峰

答案：B

解析：引物二聚体是引物自身或引物之间互补配对形成的小片段，会与目标模板竞争聚合酶和dNTP，导致非特异性扩增，电泳时出现多条杂带。

7.以下哪种措施不能有效预防PCR实验室的交叉污染？

A.不同区域使用专用移液器

B.扩增产物离心后再开盖

C.每日用75%乙醇擦拭实验台面

D.样本处理区使用带滤芯吸头

答案：C

解析：75%乙醇主要用于杀灭细菌等微生物，对DNA/RNA无降解作用。预防核酸污染需使用含1%次氯酸钠的溶液或DNA酶清除剂，乙醇无法有效去除残留核酸。

8.某qPCR实验中，阴性对照出现明显扩增曲线（Ct值＜35），最可能的原因是？

A.引物浓度过低

B.模板量过高

C.试剂被污染

D.退火温度过高

答案：C

解析：阴性对照应无扩增，若出现Ct值，说明反应体系（如引物、dNTP、水等）或操作过程中引入了目标核酸污染，需排查试剂来源和操作规范。

9.逆转录PCR（RT-PCR）中，逆转录反应的关键温度参数是？

A.95℃变性

B.55℃退火

C.42℃延伸

D.72℃终延伸

答案：C

解析：逆转录酶（如M-MLV）的最适反应温度通常为42℃左右，在此温度下，引物与RNA模板结合，酶催化合成cDNA第一条链。

10.PCR扩增效率（E）的计算公式是？

A.E=10^(-1/斜率)-1

B.E=斜率×10-1

C.E=10^(斜率)-1

D.E=1/斜率×10-1

答案：A

解析：通过标准曲线法计算扩增效率时，斜率（S）与效率的关系为E=10^(-1/S)-1，理想效率为1（即100%），对应斜率约为-3.32。

11.以下哪种情况会导致PCR产物出现“smearedband”（拖尾条带）？

A.模板浓度过低

B.dNTP浓度过高

C.退火温度过高

D.引物浓度过低

答案：B

解析：dNTP浓度过高会增加聚合酶的错误掺入率，导致非特异性扩增产物长度不一，电泳时呈现拖尾。模板过低可能无条带，退火温度过高可能无扩增，引物过低可能扩增效率下降。

12.生物安全柜的主要作用是？

A.保持实验环境恒温

B.防止实验人员接触感染性物质

C.提高PCR扩增效率

D.减少气溶胶对环境的污