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林木转基因CRISPR载体构建试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.CRISPR系统中负责识别靶向序列的是（）

A.Cas蛋白B.gRNAC.tracrRNAD.以上都不是

2.构建CRISPR载体常用的工具酶是（）

A.连接酶B.限制性内切酶C.蛋白酶D.淀粉酶

3.以下哪种是常用的林木转化方法（）

A.热激法B.农杆菌介导法C.超声波法D.光照法

4.CRISPR系统最早发现于（）

A.细菌B.植物C.动物D.病毒

5.设计gRNA时，一般其长度约为（）

A.10bpB.20bpC.30bpD.40bp

6.构建载体时，目的基因插入载体的位置是（）

A.启动子上游B.启动子下游C.终止子上游D.终止子下游

7.用于转化林木细胞的感受态细胞制备常用（）处理

A.CaCl?B.NaClC.KClD.MgCl?

8.检测载体是否成功导入林木细胞常用的方法是（）

A.观察颜色B.抗性筛选C.测量重量D.闻气味

9.在CRISPR载体构建中，标记基因的作用是（）

A.编码蛋白质B.筛选阳性克隆C.调控基因表达D.增加载体稳定性

10.构建CRISPR载体的基本步骤顺序是（）

A.酶切、连接、转化、筛选B.连接、酶切、转化、筛选

C.转化、酶切、连接、筛选D.筛选、酶切、连接、转化

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.以下属于CRISPR系统组成部分的有（）

A.Cas蛋白B.gRNAC.tracrRNAD.启动子

2.构建林木转基因CRISPR载体需要的材料有（）

A.载体B.目的基因C.工具酶D.感受态细胞

3.影响农杆菌介导林木转化效率的因素有（）

A.农杆菌菌株B.林木受体材料C.共培养条件D.培养基成分

4.设计gRNA时需要考虑的因素有（）

A.特异性B.脱靶效应C.长度D.GC含量

5.以下哪些是常用的载体类型（）

A.质粒载体B.病毒载体C.人工染色体载体D.脂质体载体

6.筛选阳性克隆的方法有（）

A.抗生素抗性筛选B.蓝白斑筛选C.PCR鉴定D.测序鉴定

7.在林木转基因过程中，可能遇到的问题有（）

A.转化效率低B.基因沉默C.插入突变D.载体不稳定

8.CRISPR技术相比传统基因编辑技术的优势有（）

A.操作简便B.特异性高C.成本低D.可编辑多基因

9.载体构建过程中，酶切反应的条件包括（）

A.酶的种类B.反应温度C.反应时间D.缓冲液

10.对转化后的林木细胞进行培养时，需要的条件有（）

A.合适的培养基B.温度C.光照D.气体成分

三、判断题（每题2分，共10题）

1.CRISPR系统只能用于植物基因编辑。（）

2.构建载体时，限制性内切酶的选择只需要考虑识别位点。（）

3.农杆菌介导转化林木时，不需要进行无菌操作。（）

4.gRNA可以随意设计，不需要考虑其他因素。（）

5.载体构建成功后一定能在林木细胞中正常表达。（）

6.抗性筛选是检测载体是否导入的唯一方法。（）

7.转化后的林木细胞可以直接移栽到土壤中。（）

8.CRISPR技术不会出现脱靶效应。（）

9.构建载体时，连接反应的温度越高越好。（）

10.不同的林木品种对转化的敏感性相同。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述CRISPR系统基因编辑的基本原理。

答案：CRISPR系统中，gRNA识别并结合靶向DNA序列，引导Cas蛋白对靶位点进行切割，造成双链断裂，细胞自身的修复机制对断裂处进行修复，实现基因编辑。

2.构建林木转基因CRISPR载体时，如何选择合适的载体？

答案：要考虑载体的复制原点、多克隆位点、标记基因。复制原点保证载体在宿主细胞中复制，多克隆位点便于目的基因插入，标记基因利于筛选阳性克隆，还需结合林木转化方法和实验目的选择。

3.简述农杆菌介导林木转化的主要步骤。

答案：先准备农杆菌和林木受体材料，将重组载体导入农杆菌；然后用农杆菌侵染林木受体材料，共培养；之后进行筛选培养，获得转化植株；最后对转化植株进