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基于iTRAQ技术解析陆地棉抗黄萎病蛋白组及抗病基因功能

一、引言

1.1研究背景

陆地棉（GossypiumhirsutumL.）作为世界上最重要的棉花栽培种，在全球农业和纺织业中占据着举足轻重的地位。从农业视角来看，陆地棉是世界上播种面积最大、产量最高的棉种，其种植范围广泛，在中国的河北、山西、山东、安徽、浙江等地普遍栽培，同时在孟加拉国、伯利兹、贝宁、巴西等众多国家也均有引种。陆地棉的种植不仅为众多棉农提供了经济收入来源，也对保障全球棉花供应稳定起着关键作用。在纺织领域，陆地棉是优良的纺织原料，其纤维是纺织工业的主要原材料之一，关系着国计民生，在国民经济中占有重要地位。由陆地棉纤维制成的纺织品，以其柔软舒适、透气吸汗等优点深受消费者喜爱，广泛应用于服装、家纺等多个行业。不仅如此，陆地棉生产过程中产生的棉籽，还具有极高的经济价值，可经加工制成燃油、饲料和食用油等，进一步拓展了陆地棉的产业链，提升了其综合经济效益。

然而，陆地棉的种植面临着诸多挑战，其中黄萎病是影响其产量和品质的最主要病害之一，被称为棉花的“癌症”。黄萎病的发生给棉花产业带来了严重的经济损失，制约了棉花种植业的可持续发展。因此，深入研究陆地棉抗黄萎病的分子机制，挖掘抗病相关基因，对于培育抗黄萎病的棉花新品种具有重要的理论和实践意义。

1.2棉花黄萎病概述

棉花黄萎病是由大丽轮枝菌（VerticilliumdahliaeKleb.）引起的一种土传维管束病害。大丽轮枝菌属于半知菌亚门轮枝菌属真菌，其寄主范围极广，国外报道可为害38科660种植物，其中农作物184种，杂草153种；我国经鉴定，寄主植物至少20科80种，大田作物包括向日葵、茄子、辣子、番茄、烟草、马铃薯、甜瓜、西瓜、黄瓜、花生、菜豆、绿豆、大豆、芝麻、甜菜等。该病菌在10-30℃均可生长，最适生长温度为20-25℃，33℃时绝大多数菌株不生长，但有些菌株耐高温能力较强，仍能缓慢生长。

大丽轮枝菌在病害循环后期能够产生一种休眠结构——微菌核，该结构能够随植物残体进入土壤，并在土壤中存活十几年。当遇到适当的宿主植物，微菌核就能够萌发产生菌丝侵染宿主。大丽轮枝菌主要从棉花根毛细胞、根表皮细胞或根部伤口侵入，经过皮层进入导管。病菌侵入后，一方面产生致病毒素，如轮枝菌素（VD-toxin），这是导致棉花萎蔫的主要原因；另一方面，病菌在导管内大量繁殖，刺激邻近的薄壁细胞产生凝胶体、树胶和侵填体，同时病菌产生果胶酶，分解细胞和细胞壁中的胶状物质和果胶物质，引起组织解体，从而堵塞导管，阻碍水分和养分的运输，导致棉花植株出现黄化、萎蔫症状，维管束褐化，严重时整株死亡。

由于大丽轮枝菌的休眠结构微菌核在土壤中存活时间长，且传播途径广泛，可通过带菌的棉种、土壤、流水、耕作等途径传播，使得黄萎病难以根除，给棉花生产带来了极大的威胁。

1.3陆地棉抗黄萎病研究现状

长期以来，科研人员围绕陆地棉抗黄萎病开展了大量研究工作，在抗病基因筛选、分子机制探索等方面取得了一定进展。

在抗病基因筛选方面，通过对陆地棉种质资源的筛选和鉴定，发现了一些具有抗黄萎病潜力的基因。例如，河北农业大学马峙英团队通过对陆地棉现代品种基因组的研究，发现编码肉桂酰辅酶A还原酶的基因在早期品种TM-1中存在1个缺失，影响了抗黄萎病功能，而现代品种较早期品种获得了一些结构变异，对黄萎病抗性产生影响。此外，利用分子标记技术、转录组测序、基因芯片等手段，也鉴定出了一批与陆地棉抗黄萎病相关的基因，这些基因涉及植物激素信号转导、细胞周期调控、细胞壁合成与降解、活性氧代谢等多个生物学过程。

在分子机制研究方面，研究表明植物在受到大丽轮枝菌侵染后，会激活一系列的防御反应。例如，通过信号转导途径，激活相关基因的表达，合成病程相关蛋白、植保素等物质，增强植物的抗病能力。同时，植物激素如水杨酸（SA）、茉莉酸（JA）、乙烯（ET）等在植物抗黄萎病过程中也发挥着重要作用，它们通过相互作用，调节植物的防御反应。

然而，当前陆地棉抗黄萎病研究仍存在一些不足。一方面，虽然鉴定出了一些抗病相关基因，但这些基因的功能验证和调控机制研究还处于初级阶段，大部分基因的具体作用和调控网络仍不清楚；另一方面，棉花-黄萎病菌互作机制复杂，黄萎病抗性是多基因协作控制的数量性状，这使得抗黄萎病育种工作面临巨大挑战。因此，需要进一步深入研究陆地棉抗黄萎病的分子机制，挖掘更多有效的抗病基因，为棉花抗黄萎病育种提供理论支持和基因资源。

1.4iTRAQ技术在植物研究中的应用

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