实时荧光定量PCR技术在肿瘤分子病理检测中的应用2026.pptxVIP

实时荧光定量PCR技术在肿

瘤分子病理检测中的应用;

样本选择与前处理

检测流程与结果分析

质量控制

常见问题与处理建议;

样本选择与前处理;强烈推荐使用手术切除组织或活检组织FFPE样本

在肿瘤分子病理检测中，应优先选择手术切除组织或活检组织的福尔马林固定石蜡包埋样本，以确保检测结果的准确性和可靠性。;

对于质控合格的细胞学样本，可涂片或液基细胞学制片，镜下评估肿瘤细胞数量及比例。;

外周血ctDNA的定义与重要性

循环肿瘤DNA(ctDNA)是从血液中检测到的来自肿瘤细胞的DNA片段，对癌症的早期诊断和治疗监测具有重要意义。;

检测流程与结果分析;

吸附柱法01

吸附柱法利用特殊材料吸附核酸，适用于大多数样本类型。

磁珠法02

磁珠法通过磁性颗粒捕获核酸，适合高纯度核酸提取。

商品化试剂盒与自建试剂选择03

推荐使用经NMPA注册/备案的商品化试剂盒，确保性能稳定。;

qPCR检测与结果分析

核酸提取与质量评估

核酸的质量和纯度是qPCR检测结果准确可靠的基础。推荐使用紫

外分光光度计进行检测，确保

DNA和RNA的A260/280比值在规定范围内。;

患者及样本信息

报告应包括患者的姓名、性别、年龄等基本信息，以及样本来源、接收时间和病理质控信息。

检测项目与方法

报告需明确指出检测的基因变异位点，使用的qPCR试剂盒及其性能参数，如敏感度和特异度。

检测结果与局限性说明

报告应详细列出检测到的基因变异位点和结果，同时注明检测的责任范围及可能存在的局限性。;

质量控制;

试剂性能验证

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准确度验证

通过使用标准品和已知结果的临床样本进行验证，评估阳性符合率和阴性符合率。;

失控分析与纠正措施

当室内质控结果失控时，需立即进行失控分析并采取相应的纠正和预防措施，防止问题再次发生。;定期参加室间质评并通过评估，可增强实验室在行业内的信誉和认可度。

提升实验室信誉;

常见问题与处理建议;

样本质量问题的解决

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二;

可能涉及仪器、耗材、试剂及实验流程等方面问题，需要详细检查和调整实验设置。;

PCR抑制物影响

样本中存在血红素及其前体或降解产物等PCR抑制物，可能导致突变位点Ct值临界或假阴性。;

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