医学免疫学--免疫学技术.pptVIP

免疫学技术Immunologicaltechniques

抗原-抗体反应的特点抗原-抗体的结合是特异性结合亲和力or亲合力抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合抗原抗体反应可分为两个阶段特异性结合阶段可见的反应阶段抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，与两者的分子比例密切相关抗原抗体结合在一定条件下可解离，具有可逆性

抗原抗体比例对反应现象的影响

抗原-抗体反应受多种因素影响1.电解质：抗原-抗体反应通常应用生理盐水或PBS作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2.温度：一般常使用反应在37℃水浴或孵育箱中进行。3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度为PH6-8。

抗原抗体的检测方法凝集反应沉淀反应免疫标记技术

细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象，称为凝集反应。1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。凝集反应（Agglutination）

凝集试验

血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。沉淀反应（Precipitation）

是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。单向免疫扩散（SingleImmunodiffusion）

是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。双向免疫扩散（DoubleImmunodiffusion）

对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis)是将双向免疫扩散与电泳相结合的一种技术。在pH8.6的缓冲液中，蛋白质抗原带负电荷向正极泳动；而抗体大部分属于Ig，由于分子量大，暴露的极性基团较少，在离子琼脂中泳动缓慢，同时受电渗作用的影响向负极泳动在抗原抗体相遇的最适比例处形成乳白色沉淀线。

免疫标记技术用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变抗体（或抗原）的免疫学特性，同时标记物的性质依然存在，因而极大的提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。免疫标记技术主要有三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记技术。

酶免疫测定(EnzymeImmunoassay,EIA)是用酶（常用的有辣根过氧化物酶HRP和碱性磷酸酶AP)标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，后者测定组织中或细胞表面的抗原。

是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有间接法、双抗体夹心法、BAS-ELISA等。酶联免疫吸附试验（EnzymeLinkedImmunosorbentAsaay,ELISA）

是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素FITC和藻红蛋白PE)与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。常用直接荧光法和间接荧光法。免疫荧光显微技术（ImmunofluorescenceTechnique）

直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。

间接免疫荧光法示意图

免疫组化技术：1.组织或细胞表面抗原的检测；2.可定位，定性，定量；3.直接法，间接法；4.显微镜，电镜或荧光显微镜观察结果

免疫胶体金标记技术（Immunogoldlabellingtechique)是采用胶体金标记抗体或抗原，用于检测未知的抗原或抗体的方法。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂的作用下，聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种带负电的、稳定的胶体状态，故称胶体金。