山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）实时荧光 定量 PCR 检测技术规程.docxVIP

ICS11.220CCSB41

NXSLX

宁夏饲料工业协会团体标准

T/NXSLX0103—2025

山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）实时荧光定量PCR检测技术规程

RegulationofpracticefordetectionofMycoplasmacapricolumsubsp.

Capripneumoniaebyquantitativereal-timePCR

2025-11-17发布2025-12-17实施

宁夏饲料工业协会发布

T/NXSLX0103—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心提出。

本文件由宁夏饲料工业协会归口。

本文件起草单位：宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心、青岛立见生物科技有限公司。

本文件主要起草人：吴亚文、邸静、安玲玲、尹才、白涛涛、罗龙龙、任子昱、蔡冬冬、吴绿怡、周爽、王晓亮、李知新、周海宁、王建东、郭亚男、张成莲、马龙、马彦龙、赵燕、马金昕。

T/NXSLX0103—2025

1

山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）实时荧光定量PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了山羊支原体山羊肺炎亚种（Mccp）实时荧光定量PCR检测时的仪器设备、样品采集、保存和运输、实时荧光定量PCR操作程序、结果判定、注意事项。

本文件适用于山羊的鼻拭子、肺脏和胸水等样品中Mccp核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

GB/T34720山羊接触传染性胸膜肺炎诊断技术

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

山羊支原体山羊肺炎亚种Mycoplasmacapricolumsubsp.Capripneumoniae，Mccp

山羊支原体山羊肺炎亚种是引起山羊传染性胸膜肺炎（CCPP）的病原体，属于支原体科支原体属，无细胞壁、能通过细菌滤器的革兰氏阴性微生物。

4仪器设备

4.1荧光聚合酶链式反应检测仪（PCR仪）。

4.2Ⅱ级生物安全柜。

4.3台式冷冻离心机（可控温至4℃、离心速度可达13000r/min以上）。

4.4冰箱（2℃~8℃、-20℃和-70℃)。

4.5微量移液器（0.1μL～2.5μL、1μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL）及匹配的带滤芯吸头。

4.6高压灭菌锅。

4.7耗材。

4.7.11.5mL和5mL离心管。

4.7.20.2mLPCR薄壁管或八联管。

4.7.35mL样品保存管。

5试剂

5.1除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的三级水。

5.2DNA提取试剂盒。

5.3Mccp引物荧光探针引物和序列（参见附录A）。

5.4荧光PCR酶。反应液含有Taq聚合酶和反应缓冲液配制（参见附录B）。

5.5阳性对照。灭活的Mccp-14020培养物，经GB/T34720规定的PCR方法和细菌基因组三代测序验证为Mccp病原。

T/NXSLX0103—2025

2

5.6阴性对照。用无菌无核酶水作为阴性对照。

6样品的采集、保存和运输

6.1样品的采集

样品的采集按照NY/T541的规定执行。取发病山羊的鼻拭子、肺脏和胸水等样品。

6.2样品的保存

采集的样品无法在12h内送检的情况下，应根据不同的检测要求，将样品按所需温度分类保存于冰箱、冰柜中。

6.3样品的运输

采集的样品应以最快最直接的途径送往实验室，对于可在采集后24h内送达实验室的样品，可放在2℃~8℃的容器中冷藏运输；对于不能在24h内送达实验室但不影响检验结果的样品，应以冷冻状态运送。

6.4样品的处理

在样本制备区进行。样品处理方法按照GB/T347