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2025化验员读本难点试题及答案

一、滴定分析综合应用题

某实验室需测定工业碳酸钠（Na?CO?）样品的纯度，样品中可能含NaHCO?或NaOH杂质。实验室提供0.1000mol/LHCl标准溶液、酚酞指示剂（变色范围pH8.2-10.0）、甲基橙指示剂（变色范围pH3.1-4.4）及常规玻璃仪器。

（1）设计实验方案，说明滴定步骤、指示剂选择及判断依据；

（2）若称取样品0.2000g，用HCl滴定至酚酞褪色消耗V?=15.20mL，继续滴定至甲基橙变色消耗V?=25.30mL，判断杂质种类并计算样品中Na?CO?的质量分数（Na?CO?摩尔质量105.99g/mol）；

（3）若滴定过程中未将锥形瓶内壁残留的溶液冲洗下去，对结果有何影响？

答案：

（1）实验方案：采用双指示剂法。步骤如下：

①准确称取样品mg，溶解于去离子水，转移至锥形瓶；

②加入2-3滴酚酞指示剂，用HCl标准溶液滴定至溶液由红色变为无色（第一终点），记录消耗体积V?；

③继续加入2-3滴甲基橙指示剂，继续用HCl滴定至溶液由黄色变为橙色（第二终点），记录消耗体积V?（从第一终点到第二终点的体积）。

指示剂选择依据：酚酞的变色点接近Na?CO?滴定至NaHCO?的化学计量点（pH≈8.3），此时Na?CO?反应生成NaHCO?，NaOH完全中和为NaCl；甲基橙的变色点接近NaHCO?滴定至CO?的化学计量点（pH≈3.9），此时NaHCO?（包括原样品中的NaHCO?及第一步生成的NaHCO?）完全反应为CO?和H?O。

（2）杂质种类判断及纯度计算：

双指示剂法中，若样品含Na?CO?（无其他杂质），则V?=V?；若含NaOH（V?V?），因NaOH中和需HCl，而Na?CO?第一步滴定生成NaHCO?需V?，第二步NaHCO?滴定需V?=V?（纯Na?CO?时）；若含NaHCO?（V?V?），因第一步仅中和NaOH（若有）和部分Na?CO?，第二步需滴定原样品中的NaHCO?和第一步生成的NaHCO?。

本题中V?=15.20mL，V?=25.30mL（V?V?），说明样品含NaHCO?杂质。

Na?CO?的物质的量由第一终点反应决定：Na?CO?+HCl=NaHCO?+NaCl，故n(Na?CO?)=n(HCl)第一终点=0.1000mol/L×0.01520L=0.001520mol。

Na?CO?质量分数=（0.001520mol×105.99g/mol）/0.2000g×100%=80.62%。

（3）未冲洗锥形瓶内壁残留溶液，会导致部分样品未参与反应，第一终点V?偏小，第二终点V?也偏小。但Na?CO?的量由V?计算，因此结果会偏低。

二、高效液相色谱（HPLC）故障分析与优化题

某实验室用C18色谱柱（5μm，4.6×250mm）分析某药物中的有效成分（弱酸性，pKa=4.5），流动相为甲醇-水（50:50，未调pH），检测波长254nm。实验中出现以下问题：

（1）目标峰保留时间不稳定（RSD5%）；

（2）目标峰拖尾因子（T）=1.8（要求T≤1.5）；

（3）分离度（R）=1.2（要求R≥1.5）。

针对以上问题，分析可能原因并提出解决方案。

答案：

（1）保留时间不稳定的可能原因及解决：

①流动相组成波动：甲醇与水的互溶性良好，但未使用在线脱气装置时，溶解气体析出会导致流速变化。需使用在线脱气机或超声脱气15min以上。

②柱温波动：HPLC对温度敏感，尤其在反相色谱中，温度变化影响流动相黏度和固定相溶胀。应使用柱温箱，设定恒定温度（如30℃±0.5℃）。

③进样量过大或样品溶剂强度过高：若样品用纯甲醇溶解，而流动相含50%水，高溶剂强度会导致样品在柱顶瞬间洗脱，保留时间波动。应调整样品溶剂为流动相组成（甲醇-水50:50），或降低进样量（如从20μL降至10μL）。

（2）峰拖尾的可能原因及解决：

目标成分为弱酸性（pKa=4.5），流动相未调pH（约中性），此时部分分子以离子形式（A?）存在，与C18固定相的硅羟基（-Si-OH）发生静电作用，导致拖尾。

解决方案：调节流动相pH至2-3（低于pKa2个单位），使目标成分主要以分子形式（HA）存在，减少与硅羟基的相互作用。可加入0.1%磷酸或0.05mol/L醋酸铵缓冲液（pH=3.0）。

（3）分离度不足的可能原因及解决：

分离度R=（tR2-tR1）/[0.5(W1+W2)]，受保留因子（k）、选择性因子（α）和柱效（N）影响。当前R=1.2，可能因α过小（目标峰与相邻杂质峰的保留差异不足）或柱效降低。

解决方案