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第三章基因工程知识填空

第1节重组DNA技术的基本工具

一、基因工程的概念和工具酶

1.基因工程的概念:指按照人们的愿望,通过________________,赋予生物____________________,创造出更符合人们需要的________________________________。由于基因工程是在____________水平上进行设计和施工的,因此又叫作________________。

概念剖析

2.基因工程的工具酶

(1)限制性内切核酸酶(限制酶)——“分子手术刀”

来源

主要来自____________

种类

数千种

作用

识别双链DNA分子的________________,使每一条链中__________的__________________断开

结果

产生____________或平末端

(2)DNA连接酶——“分子缝合针”

①作用:将__________________连接起来,恢复被________切开的两个核苷酸之间的______________。

②种类

种类

来源

特点

________DNA连接酶

____________

只能将具有________________的DNA片段连接起来,不能连接具有平末端的DNA片段

T4DNA连接酶

T4噬菌体

既可以“缝合”双链DNA片段互补的__________,又可以“缝合”双链DNA片段的______________,但连接平末端的效率相对较低

基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”

1.种类:质粒、________、动植物病毒等。

2.常用载体——质粒

(1)本质:质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有______________能力的环状双链DNA分子。

(2)质粒作为载体所具备的条件及原因

条件

原因

稳定存在并能____________________________

能使目的基因稳定存在且数量可扩增

有一个至多个______________位点

可携带多个或多种外源基因

具有特殊的________

便于重组DNA分子的________

无毒害作用

对受体细胞无毒害作用,避免受体细胞受到损伤

(3)作用

①作为运输工具,将外源基因导入_________________________________________。

②质粒携带________________在细胞内大量复制或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制。

基因工程的基本操作程序

一、目的基因的筛选与获取

1.培育转基因抗虫棉的四个步骤

(1)目的基因的____________。

(2)________________的构建。

(3)将目的基因导入____________。

(4)目的基因的____________。

2.目的基因

(1)概念:在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期__________等的基因就是目的基因。

(2)作用:根据不同的需要,目的基因是不同的,它主要是指____________的基因。

(3)实例:培育转基因抗虫棉用到的________________,即Bt基因。

3.筛选合适的目的基因:从______________________________的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。

4.获取目的基因的方法

(1)____________目的基因。

(2)常用____________特异性地快速扩增目的基因。

(3)通过构建__________来获取目的基因。

5.利用PCR获取和扩增目的基因

(1)含义:PCR是________________的缩写。它是一项在体外提供参与DNA复制的______________与____________,对目的基因的______________进行大量复制的技术。

(2)原理:________________。

(3)基本条件

①场所:在一定的________溶液中进行,其中一般要添加Mg2+。

②模板:DNA母链。

③原料:4种______________。

④酶:____________的DNA聚合酶。

⑤引物:使DNA聚合酶能够从引物的________端开始连接脱氧核苷酸。

(4)过程

①变性:当温度超过______℃时,双链DNA______为单链。

②复性:当温度下降到______℃左右时,____________通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

③延伸:当温度上升到______℃左右时,溶液中的4种脱氧核苷酸在____________________的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。

(5)鉴定:常采用________________来鉴定PCR的产物。

二、基因表达载体的构建

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