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第三章基因工程知识填空
第1节重组DNA技术的基本工具
一、基因工程的概念和工具酶
1.基因工程的概念:指按照人们的愿望,通过________________,赋予生物____________________,创造出更符合人们需要的________________________________。由于基因工程是在____________水平上进行设计和施工的,因此又叫作________________。
概念剖析
2.基因工程的工具酶
(1)限制性内切核酸酶(限制酶)——“分子手术刀”
来源
主要来自____________
种类
数千种
作用
识别双链DNA分子的________________,使每一条链中__________的__________________断开
结果
产生____________或平末端
(2)DNA连接酶——“分子缝合针”
①作用:将__________________连接起来,恢复被________切开的两个核苷酸之间的______________。
②种类
种类
来源
特点
________DNA连接酶
____________
只能将具有________________的DNA片段连接起来,不能连接具有平末端的DNA片段
T4DNA连接酶
T4噬菌体
既可以“缝合”双链DNA片段互补的__________,又可以“缝合”双链DNA片段的______________,但连接平末端的效率相对较低
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
1.种类:质粒、________、动植物病毒等。
2.常用载体——质粒
(1)本质:质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有______________能力的环状双链DNA分子。
(2)质粒作为载体所具备的条件及原因
条件
原因
稳定存在并能____________________________
能使目的基因稳定存在且数量可扩增
有一个至多个______________位点
可携带多个或多种外源基因
具有特殊的________
便于重组DNA分子的________
无毒害作用
对受体细胞无毒害作用,避免受体细胞受到损伤
(3)作用
①作为运输工具,将外源基因导入_________________________________________。
②质粒携带________________在细胞内大量复制或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制。
基因工程的基本操作程序
一、目的基因的筛选与获取
1.培育转基因抗虫棉的四个步骤
(1)目的基因的____________。
(2)________________的构建。
(3)将目的基因导入____________。
(4)目的基因的____________。
2.目的基因
(1)概念:在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期__________等的基因就是目的基因。
(2)作用:根据不同的需要,目的基因是不同的,它主要是指____________的基因。
(3)实例:培育转基因抗虫棉用到的________________,即Bt基因。
3.筛选合适的目的基因:从______________________________的基因中进行筛选是较为有效的方法之一。
4.获取目的基因的方法
(1)____________目的基因。
(2)常用____________特异性地快速扩增目的基因。
(3)通过构建__________来获取目的基因。
5.利用PCR获取和扩增目的基因
(1)含义:PCR是________________的缩写。它是一项在体外提供参与DNA复制的______________与____________,对目的基因的______________进行大量复制的技术。
(2)原理:________________。
(3)基本条件
①场所:在一定的________溶液中进行,其中一般要添加Mg2+。
②模板:DNA母链。
③原料:4种______________。
④酶:____________的DNA聚合酶。
⑤引物:使DNA聚合酶能够从引物的________端开始连接脱氧核苷酸。
(4)过程
①变性:当温度超过______℃时,双链DNA______为单链。
②复性:当温度下降到______℃左右时,____________通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
③延伸:当温度上升到______℃左右时,溶液中的4种脱氧核苷酸在____________________的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
(5)鉴定:常采用________________来鉴定PCR的产物。
二、基因表达载体的构建
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