第二章--细胞培养及培养细胞的生物学特点.pptVIP

细胞工程的研究范畴;第二章细胞培养

及培养细胞的生物学特点;第一节组织培养(tissueculture);体外培养的种类;二、细胞培养的优点;

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;4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术、记录方法：

研究:倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显

微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫

组织化学、原位杂交、同位素标记

记录:摄影照片、缩时电影、电视;6.研究的费用相对较经济

可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。;1、体外培养的细胞，尤其是反复传代、长期培养者，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。

2、细胞培养对人员、设备等条件都要求较高。这些都影响细胞培养技术的更广泛应用。

3、?动物细胞的培养对营养的要求较高。

4、动物细胞培养的另一个突出特点，是对环境条件要求严格。;正确认识：现在人工模拟体内环境的技术已经很高,但,人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同，当细胞被置于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中,久了，必然发生变化。

因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。

;第二节

细胞培养的细胞生物学;一、体内外细胞的差异及分化;（一）体内外细胞的差异

1.与体内主要不同

相对孤立、相对单一，缺乏体内的系统作用，失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。

;（二）培养细胞的分化;;（一）体外细胞培养物的生长类型;1、贴附(粘附)型细胞;分类

根据形态大致的不同，主要4类：

上皮细胞型

成纤维细胞型

游走细胞性

多形型细胞

;（1）上皮细胞型;生长特点

易相连成片，

相靠紧密相连，

成薄层铺石状。

生长时呈膜状

移动，很少脱离

细胞群而单个活动

;生长特点

排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动。

游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。;（3）游走细胞型

细??质常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动，贴附于支持物上散在生长，一般不连接成片。该类细胞形状很不稳定，有时与上皮样细胞或成纤维细胞难以区别。单核细胞、巨噬细胞及某些肿瘤细胞在体外培养时常呈现此种形态。;（4）多形型细胞

生长时像神经细胞那样呈多角形，并伸出较长的神经纤维，很难确定它们的形状，因而我们将此类细胞称为多形型细胞。体外培养时常见的多形型细胞是神经元和神经胶质细胞。;2、悬浮生长型

;优点

生存空间大，提供数量大

传代方便(不需消化)

易于收获

可获得稳定状态

缺点

观察不方便

很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)

;三、培养细胞的生长特点;;四、培养细胞的生长和增殖过程;（一）单个细胞的生长过程;（二）培养细胞生命期

(LifeSpanofCultureCells);正常培养的细胞周期;原代培养(PrimaryCulture)期;特点：在全生命期中此期的持续时间最长，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型。;衰退期：

特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。;（三）体外培养细胞一代生存期;潜伏期：包括悬浮期及潜伏期。当细胞接种入新的培养器皿，不论是何种细胞类型、其原来的形态如何，此时细胞的胞质回缩，胞体均呈圆球形。先悬浮于培养液中，短时间后，那些尚可能存活的细胞，即开始附着于底物，并逐渐伸展，恢复其原来的形态。再经过一潜伏期，此时细胞已存活，具有代谢及运动但尚无增殖发生。以后出现细胞分裂并逐渐增多而进入指数生长期。;指数增生期：又称对数期。此期细胞增殖旺盛，成倍增长，活力最佳，适用于进行实验研究。细胞生长增殖状况可以细胞倍增情况（细胞群体倍增时间）及细胞分裂指数等来判断。在此阶段，若细胞处于理想的培养条件，将不断生长繁殖，细胞数量日渐增加。细胞将接触而连成一片，渐次长满培养器皿底面，提供细胞生长的区域逐渐减少甚至消失。因接触抑制而细胞运动停止、密度抑制而细胞终止分裂。;停止期：又称平台期，此期可供细胞生长的底物面积已被生长的细胞所占满，细胞虽尚有活力但已不再分裂增殖。此时细胞虽已