基础化学--高效液相色谱法.pptVIP

药用基础化学（一）

高效液相色谱法仪器分析法主讲人：

高效液相色谱法三七皂苷含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。

色谱法概述高效液相色谱法基本原理学习内容123高效液相色谱法主要应用高效液相色谱法

色谱法：一种依据物质的物理或物理化学性质的不同而进行分离分析的方法。1.色谱法概述高效液相色谱法固定相：固定不动的相。CaCO3流动相：携带样品向前移动的相。石油醚

按流动相状态分按操作形式分柱色谱、薄层色谱、纸色谱液相色谱法（LC）气相色谱法（GC）超临界流体色谱法（SFC）色谱法1.色谱法概述高效液相色谱法按分离机制分吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱……

2.高效液相色谱法基本原理高效液相色谱法进样口色谱图色谱柱溶剂高压泵混合器高效固定相高灵敏检测器输液系统进样系统分离系统检测系统数据处理系统

根据分离原理不同：液-固吸附色谱法化学键合相色谱法离子交换色谱法分子排阻色谱法……高效液相色谱法高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理

1）液-固吸附色谱法：高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理利用固定相对不同组分的吸附能力的差别实现分离固定相——硅胶表孔硅胶无定形全多孔硅胶球形全多孔硅胶堆积硅珠

高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理利用固定相对不同组分的吸附能力的差别实现分离固定相——高分子多孔微球（也称有机胶）有机胶的表面为芳烃官能团，流动相为极性溶剂，相当于反相洗脱。选择性好、峰形好1）液-固吸附色谱法：

高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理利用固定相对不同组分的吸附能力的差别实现分离流动相——通过实验寻找极性大小适宜的溶剂，常用混合溶剂1）液-固吸附色谱法：

2）化学键合相色谱法：高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理将有机固定液键合在载体表面而生成化学键合固定相适用于分离几乎所有类型的化合物载体表面应有活性基团固定液应有与载体表面反应的官能团两个条件酯化型键合相硅烷化型键合相

高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理将有机固定液键合在载体表面而生成化学键合固定相适用于分离几乎所有类型的化合物正相键合相色谱法反相键合相色谱法分类流动相极性固定性极性适用于分析溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物流动相极性固定性极性适用于分析非极性至中等极性的化合物2）化学键合相色谱法：

3）流动相的要求和洗脱方式：高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理流动相的基本要求与固定相不互溶，也不发生化学反应纯度高，黏度小与所用检测器相匹配对试样有适宜的溶解度纯化：使用前经0.45μm滤膜过滤脱气：抽真空、加热回流、超声波振荡等贮存：玻璃、不锈钢或氟塑料容器密闭贮存流动相的处理和贮存

高效液相色谱法2.高效液相色谱法基本原理恒定组成溶剂洗脱梯度洗脱洗脱方式缩短了分析周期提高了分离效能改善了色谱峰形增加了灵敏度3）流动相的要求和洗脱方式：

定性分析3.高效液相色谱法主要应用高效液相色谱法色谱鉴定法：将样品与标准品的保留时间或相对保留时间进行对照非色谱鉴定法化学鉴定法：利用化学专属反应鉴定两谱联用鉴定法：如联合红外、质谱或核磁共振

定量分析3.高效液相色谱法主要应用高效液相色谱法色谱图：基线：色谱峰：峰面积和峰高：峰高（h）峰面积（A）标准差（?）半峰宽（W1/2）峰宽（W）区域宽度：用于衡量色谱柱的柱效，区域宽度越小，色谱柱的柱效越高。保留值：保留时间、保留体积死时间、死体积调整保留时间、调整保留体积保留时间（tR）死时间（tM或t0）调整保留时间（tR）

总结色谱法：概念分类：按流动相状态分按操作形式分按分离机制分色谱法概述定性分析：色谱鉴定法；化学鉴定法；两谱联用鉴定法定量分析：峰高、峰宽、峰面积……高效液相色谱法主要应用分类：液-固吸附色谱法化学键合相色谱法……原理：流动相的要求与洗脱方式高效液相色谱法基本原理

什么叫正相色谱法？什么叫反相色谱法？它们的主要区别是什么？分别适合分析哪类物质？思考题高效液相色谱法

高效液相色谱法THANKS谢谢观看药用基础化学