5放射自显影(影像).pptVIP

放射自显影;本章重点：

放射自显影的定义

放射自显影的基本类型和基本方法

放射自显影的感光材料

;一概述;;2、放射自显影的发展;3、放射自显影的优点;局限性：

1、实验周期长。

2、定量不准确，只能半定量。;4、应用举例;具有缺陷的晶格排列;当核射线作用于溴化银结晶时，使某些分子电离射出电子，向敏化中心移动形成阴电层。

AgBr+β--Ag++Br+e-

;;2、Ag+离子向敏化中心移动：

Ag+离子向敏化中心移动，与电子结合，即射出的电子被带正电荷的银离子俘获，形成银原子。

Ag+＋e+--Ag

;3、形成潜影

许多带正电荷的银离子被显影剂还原成银原子，在该溴化银结晶颗粒中形成潜影。;;（二）潜影的消退：

已经还原的银原子在水、氧的作用下重新变成离子，使已经形成的潜影消退。

放射自显影的曝光过程应在干燥、低温或充氮气的环境下进行。;（三）显影和定影;;定影：定影液溶解未形成潜影的银晶体。

定影液=定影剂+保护剂+停显剂+坚膜剂

定影剂：溶解银晶体，海波

保护剂：抑制定影剂被酸分解，亚硫酸钠

停显剂：终止显影液的继续作用，醋酸

坚膜剂：防止乳胶膨胀、脱落、擦伤。钾矾;三放射自显影的材料;2、分类：

（1）原子核乳胶：

溴化银和明胶按照一定的比例混匀制备而成；

常温下呈粘稠液状，低温下则为胶冻状，温度升至40℃左右时为液态。

可以根据使用需要制备成各种形态;①液体核乳胶：由溴化银和明胶按照80：20的比例混合制备，可制备成不同形状和厚度。

②核乳胶干板：核乳胶胶片

③揭膜核乳胶：;中国原子能科学研究院物理生产的核乳胶

;（2）氚片：

由溴化银、碘化银和明胶组成。

银晶体颗粒平均直径为1μm

单面涂胶

主要用于3H标记化合物的自显影;（3）X线片：

由溴化银、碘化银和明胶组成。

银晶体颗粒平均直径为2.5μm

双面或单面涂胶

主要用于射线能量较高的宏观自显影

;;（4）自显影增强剂：

在感光材料里面加入荧光材料或将荧光材料制作成薄膜覆盖在凝胶表面。

感光材料在射线和光子的双重作用下面感光，可以缩短实验周期。

;暗盒和增强屏;（5）磷屏成像：

用可重复使用的磷屏作为成像板

专门的读出装置。;计算机磷屏成像系统;优点：

可用于多种核素的宏观自显影

操作简便

不需胶片和显影定影等照相处理步骤

磷屏可以重复使用

缺点：

分辨率较低

目前还不能用于高倍光镜和电镜自显影

仪器价格比较昂贵

;（二）放射自显影中常用的放射性核素;核素;四放射自显影的基本技术和方法;1、宏观自显影：

常用肉眼、放大镜或低倍显微镜观察

用灰度或黑度对比来判断示踪剂的部位和数量

优点是可以同时观察各脏器、组织中放射性示踪剂的分布，多用于小动物的整体标本，大动物的脏器或肢体，以及各种电泳谱、色谱和免疫沉淀板等的示踪研究。;;;小鼠头部的宏观自显影;凝胶电泳的自显影结果;核酸电泳展开板的放射自显影;2、光镜自显影：

以光学显微镜为工具进行观察，以镜下的银颗粒分布及数量来判断放射性核素示踪剂的部位和数量。

镜下的银颗粒为黑色或深棕色的小圆点

适用于冰冻组织切片、石蜡组织切片，血细胞涂片、骨髓细胞涂片等标本的示踪研究。

;;放射自显影检测寄生虫感染中的脾细胞;3、电镜自显影：

以电子显微镜观察，以电镜下银颗粒的分布及数量来判断。

电镜下电子轨迹为蛇样扭曲

适用于细胞超微结构上的精确定位和定量

;;蛇毒素与

乙酰胆碱

受体结合;（二）基本方法;2、示踪剂引入的方法

①体内实验：可由静脉、皮下、肌肉、腹腔注射或直接脑内注射和灌胃等途径给入放射性标记化合物。

②体外实验：可在培养瓶中给入、或将示踪剂直接加在切片上进行结合反应，洗去多余的示踪剂后再进行自显影实验。;3、标本制备：

①组织切片：

冰冻切片：

石蜡切片：;;②整体动物切片：

专用整体动物切片机上制成;;③牙齿、骨骼：制备磨片

④体液、细胞：制备涂片

⑤电镜标本：超薄切片机

⑥其它：电泳条、层析条等可干燥后使用;4、自显影片的制备方法：

①液体乳胶浸膜法：

在暗室中将液体核乳胶置37℃－40℃水浴融化，玻棒搅拌15min至均匀。将载玻片带标本的插入乳胶内，浸沾乳胶，约0.5min后缓慢匀速地垂直提出。干燥过夜。在有干燥剂的暗盒内，密封置4℃曝射。然后显影、定影、染色、封固等则在自显影结束后进行。;;②接触法：

将样品摆放在合适的载波片上，取与载波片大小相同的核乳胶干板覆盖在载波片上，用橡皮筋固定，外面包上黑纸，然后4度密封保存充分曝光。

注意：接触松紧要适当以免引起挤压效应;;③湿贴法：

暗室中将冰冻切片直接贴在干板的乳胶面，冷冻干燥后曝射。;;④揭膜法：

将核乳胶制备成核乳胶揭膜，悬浮于液体中。用固定好样品的载波片在液体中捞取揭膜，使揭