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第三章细胞生物学研究方法;第一节显微镜技术;构成：
①照明系统
②光学放大系统
③机械装置
原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。;(一)普通光学显微镜的分辨率
1.分辨率（resolution，R）
显微镜或人眼在25cm的明视距离处，能分辨
被检物体微细结构最小间隔的能力。;2.分辨率公式;几种介质的折射率;3.组织切片制备过程
⑴固定（fixation）使大分子交联而保持在原有的位置上，防止结构移位或信息丢失。
常用的固定剂：戊二醛、甲醛
⑵包埋（embedding）使组织形
成硬块，便于切片。
常用的包埋剂：石蜡、树脂
⑶切片（section）切片厚度为1～10?m。
⑷染色（staining）增大反差。;;Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreen;;;Hela细胞;（四）暗视野显微镜darkfieldmicroscope;暗视野梅毒螺旋体
;(五)显微电影摄影技术记录细胞或细胞器的运动过程
原理：用显微电影摄影术或电视录像以一定时间间隔拍摄。
应用：准确记录细胞或细胞器的运动过程和速度。;(六)共聚焦激光扫描显微镜可以提供高清晰的彩色
三维图像;共聚焦激光显微镜工作原理示意图;共聚焦激光显微镜下的血管内皮细胞微丝的分布;共聚焦激光显微镜获得被检物体三维结构的原理及呈现的三维图像;;不同光线的波长;Yeastcell;;;;;细胞融合最成熟的应用——单克隆抗体的应用;第三节细胞组分的分离和纯化
技术;;（一）差速离心Differentialcentrifugation;Lowspeed;（二）密度梯度离心;1、速度沉降velocitysedimentation;2.平衡沉降equilibriumsedimentation;Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation;;;;;PCR;双链DNA在多种酶的作用下可以变性成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
标准的PCR过程分为三步：
1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
2.退火（25℃-65℃）：系统??度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量增加一倍;;;;Southern杂交;;章节要点;复习题;
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