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牡丹体细胞胚胎发生：机制、影响因素与应用前景

一、引言

1.1研究背景与意义

牡丹（PaeoniasuffruticosaAndr.），作为芍药科芍药属的名贵观赏和药用木本花卉，被誉为“花中之王”，深受人们的喜爱。牡丹在中国的栽培历史源远流长，早在3000年前的周朝，就已作为草药被人们认识和利用。历经数千年的发展，牡丹的种植范围不断扩大，如今已遍布全球多个温带地区。其花大而美，花型丰富多样，有单瓣型、复瓣型、莲座型、千层台型、冠心型等；花色更是五彩斑斓，涵盖白、粉、红、紫、黄、绿、复色等，每种颜色又有不同的深浅变化，形成了上千种色彩组合。这些丰富的品种和艳丽的花色，使其成为园林景观中不可或缺的元素，为人们带来了极高的视觉享受。

除了极高的观赏价值，牡丹还具有重要的药用价值。牡丹的根加工制成的丹皮，是名贵的中草药，性微寒，味苦、辛，归心、肝、肾经，具有清热凉血、活血化瘀的功效。在临床上，常用于治疗温毒发斑、吐血衄血、夜热早凉、无汗骨蒸、经闭痛经、痈肿疮毒、跌扑伤痛等病症。现代研究进一步表明，牡丹皮含有多种活性成分，具有抗菌、抗炎、抗过敏、抗肿瘤、止血、祛瘀血、清热解毒、镇静、镇痛、解痉等活性，还能促进单核细胞吞噬功能，提高机体特异性免疫功能，增加免疫器官重量。

随着人们对牡丹需求的不断增加，传统的繁殖方法如分株、播种、嫁接等，已难以满足市场对牡丹种苗数量和质量的要求。分株繁殖率低，播种繁殖周期长且种子有下胚轴休眠现象，嫁接则对技术要求较高。因此，探索新的高效繁殖技术成为牡丹产业发展的关键。

体细胞胚胎发生技术作为植物离体再生的重要途径之一，具有繁殖速度快、繁殖系数高、遗传稳定性好等优点，为牡丹的快速繁殖和遗传改良提供了新的契机。通过体细胞胚胎发生技术，可以在短时间内获得大量遗传性状一致的种苗，满足市场对优质牡丹种苗的需求。此外，该技术还可以用于牡丹的基因转化和遗传工程改良，为培育具有优良性状的牡丹新品种奠定基础。例如，通过将抗逆基因导入牡丹体细胞胚，有望培育出具有更强抗病虫害、抗逆境能力的牡丹品种，从而扩大牡丹的种植范围，提高其观赏和经济价值。因此，开展牡丹体细胞胚胎发生研究具有重要的现实意义和广阔的应用前景。

1.2国内外研究现状

在国外，对牡丹体细胞胚胎发生的研究开展较早。RazmolgvVP研究了花药在MS、Waite和No.6培养基上的生长发育情况，结果仅在No.6上有一些花药分化，产生多细胞组织，在MS和Waite培养基上小孢子退化，不能发育。KunnemanBPAM等研究认为牡丹的组织培养繁殖还不可能成为一个可行的商业化生产方式。BouzaL等研究认为在组培中，牡丹外植体失去了协调生长的调节机制，并且这种代谢机制在离体培养中一直保持。他们采用改良MS培养基，进行了细胞分裂素的研究，表明BA能促进腋芽和叶的发育，而2ip不能；培养的前5d在含有BA的培养基上外植体分裂活性高于含有2ip的培养基上的外植体，且外植体中含有较高的BA，IAA含量却没有或很低；而含2ip培养基上的外植体含IAA较高，ABA在培养的第一周未检测到，而在第三周后积累，在含BA和2ip的培养基上的外植体ABA积累均高于对照，且ABA积累出现较晚。HarrisRA等研究了用3、4、5周牡丹芽进行继代培养的增殖率和生根能力，结果表明3周的芽继代增殖需要时间最短（21.7d），5周的继代增殖生根良好，生根能力与最后根重量呈负相关。

国内对牡丹体细胞胚胎发生的研究也取得了一定进展。朱向涛等以牡丹‘凤丹’的合子胚、胚轴和子叶为外植体进行离体培养，研究了种胚发育时期、不同质量浓度蔗糖处理及不同的培养基对牡丹体细胞胚发生的影响，结果表明花后110d是体细胞胚直接诱导合适的发育时期，诱导率为33.00%，3种外植体中，种胚的诱导率最高；利用质量浓度为90g?L?1的蔗糖溶液处理种胚2h，体细胞胚诱导效果最好，在MS+2,4-D2.0mg?L?1+6-BA2.0mg?L?1培养基上获得较高的体细胞胚，诱导率为38.33%。还有研究利用田间调查、常规杂交、显微观察与离体培养等方法对牡丹远缘杂交与败育机理、胚珠与胚培养以及体细胞胚诱导与再生技术进行了研究，在国内首次获得牡丹芍药组间杂种苗，并确定了主要组合的败育原因；建立了稳定的胚培养体系，在国内外首次成功诱导出牡丹体细胞胚并获得再生植株。

然而，目前牡丹体细胞胚胎发生研究仍存在一些不足之处。一方面，体细胞胚的诱导率和再生率有待进一步提高，这限制了该技术在实际生产中的应用。另一方面，对牡丹体细胞胚胎发生的分子机制研究还相