生化15.DNA重组技术.pptVIP

;主要内容;一、DNA重组技术相关概念;DNA克隆;（二）DNA重组技术常用的工具酶;1、限制性核酸内切酶

概念：是一类特异性地水解双链DNA的磷酸二酯酶．

;命名：

按酶的来源的属．种名而定，取属名的第一个字母与种名的头两个字母组成的三个斜体字母作喀语表示；如有株名，再加上一个字母，其后再按发现的先后写上罗马数字．

例如：从流感嗜血杆菌d株(Hocmophilu9inrlucn：acd)中先后分离到3种限制酶，分别命名为HindI，HindII和HindIII·;3、载体;二、DNA重组技术的基本过程;1）化学合成

2）制备的基因组DNA

3)cDNA

4）PCR技术

5)基因文库

基因文库：用基因组的总DNA制备

cDNA文库：用细胞全部mRNA经反转录制备全套cDNA后建库。;4、重组DNA分子导入受体细胞;5、DNA重组体的筛选与鉴定;是将混合在一起的限制性酶切DNA片段，用琼脂糖电泳分开，并变性为单链DNA，再转移到一张硝酸纤维素膜上。在膜上的这些DNA片段可以用p32标记的单链DNA探针杂交。再用放射自显影方法显示出与探针顺序互补的限制性酶切DNA片段的位置。用这个方法能很容易地将上百万片段中间的一个特殊片段鉴定出来。;

原位杂交

即将长在培养皿上的菌落或噬菌斑转移到硝酸纤维素膜上用标记探针进行分子杂交。

;3)PCR法：

如果巳知目的序列的长度和两端的序列，则可以合成一对引物，以转化细胞所得的DNA为模板进行扩增，若能得到预期长度的PCR产物，则该转化细胞就可能含有目的的序列．

4)DNA限制性内切酶图谱分析

目的序列插入载体会使体DNA限制性酶图谱发生变化，提取转化细菌的质粒.DNA酶切后做电泳观察其酶切图谱。

5)核苷酸序列测定

所得到的目的序列或基因的克隆，都要用其核酸序列测定来最后鉴定．;重组DNA技术与医学的关系