细胞培养中二甲基亚砜残留检测 拉曼光谱法标准立项修订与发展报告.docxVIP

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《细胞培养中二甲基亚砜残留检测拉曼光谱法》标准立项与发展报告

EnglishTitle:DevelopmentReportontheStandardizationProject:“DeterminationofDimethylSulfoxideResidueinCellCulture—RamanSpectroscopy”

摘要

随着细胞治疗、再生医学及生物制药产业的迅猛发展，以活细胞为核心的生物制剂（细胞制剂）的质量控制与安全性评价已成为制约其临床转化与产业化的关键瓶颈。在细胞制备过程中，尤其是冻存与复苏环节，广泛使用的保护剂二甲基亚砜（DMSO）的残留问题尤为突出。DMSO在生理条件下具有明确的细胞毒性及人体毒性，其残留水平直接关系到细胞制剂的效力与受者安全。尽管《中国药典》等法规文件对残留溶剂有限量要求，但行业长期缺乏针对细胞制剂这一特殊基质的、快速高效的DMSO残留检测标准。传统的气相色谱法虽准确可靠，但耗时长、流程复杂，无法满足细胞制剂短保质期对快速放行检验的迫切需求。

本报告旨在系统阐述《细胞培养中二甲基亚砜残留检测拉曼光谱法》标准立项的背景、目的意义、技术内容及其行业价值。该标准项目致力于建立一种基于拉曼光谱技术的快速、无损、高灵敏度的DMSO残留检测方法。拉曼光谱技术具有样品前处理简单、检测速度快、尤其适用于水溶液体系等独特优势，经方法学验证，其检测灵敏度与准确性可与气相色谱法相媲美，且能极大缩短检测时间。本标准的制定，将填补细胞治疗领域化学残留快速检测标准的空白，为细胞制品的质量控制、安全评价及最终产品放行提供统一、可靠的技术依据，对推动整个细胞产业的质量标准化进程、加速创新疗法的临床应用具有重大的现实意义和前瞻性价值。

关键词

-细胞培养；CellCulture

-二甲基亚砜残留；DimethylSulfoxide(DMSO)Residue

-拉曼光谱法；RamanSpectroscopy

-质量控制；QualityControl

-细胞治疗；CellTherapy

-快速检测；RapidDetection

-标准化；Standardization

-生物制品；BiologicalProducts

正文

一、立项背景与目的意义

细胞治疗作为现代医学的革命性领域，其产品（细胞制剂）的质量与安全性是决定其成功应用于临床的根本前提。在细胞制剂的制备、冻存与复苏过程中，常需添加各类外源性化学成分以维持细胞活力，其中二甲基亚砜（DMSO）是最为常用的细胞冻存保护剂。然而，DMSO是一把“双刃剑”：在低温下它能有效防止冰晶形成，保护细胞；但在正常培养温度及体内环境下，它对细胞和人体均具有显著毒性。研究表明，培养液中残留的DMSO是导致复苏后细胞活性下降、功能受损的主要原因之一。即使浓度低至0.1%，仍可对细胞生长产生抑制。对人体而言，DMSO具有潜在的血管毒性、肝肾毒性及遗传毒性。

因此，在细胞产品最终用于患者前，必须将其残留量降至安全水平。我国《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》（国卫办科教发〔2015〕46号）明确要求对培养基及添加成分残余量进行检测。《中国药典》2020年版也将DMSO列为第三类溶剂，规定其在药品中的残留限度不得高于0.5%。然而，行业面临一个严峻挑战：目前缺乏专门针对成分复杂的细胞培养体系或细胞制剂的DMSO残留检测标准。传统依赖的气相色谱法虽然检测限低、准确性高，但其样品前处理繁琐、分析周期长（通常需数小时），完全无法适应细胞制剂从生产完成到临床输注往往仅有数小时的极短“窗口期”对快速质量放行的苛刻要求。检测结果的严重滞后，已成为制约细胞产业规模化、规范化发展的技术瓶颈之一。

在此背景下，开发并标准化一种快速、高效的DMSO残留检测方法势在必行。拉曼光谱分析技术为此提供了完美的解决方案。该技术基于拉曼散射效应，通过分析物质独特的“指纹光谱”实现化学成分的定性与定量。其突出优势在于：

1.快速无损：样品通常无需复杂前处理，可实现原位、实时检测，单次测量可在几分钟内完成。

2.适用于水溶液：水的拉曼散射信号极弱，对体系中待测物的干扰小，特别适合像细胞培养液这类以水为基质的样品。

3.高灵敏度与特异性：结合表面增强拉曼散射（SERS）技术，可大幅提升检测灵敏度，理论上可达痕量甚至单分子水平；且拉曼特征峰尖锐，易于识别与定量。

4.技术成熟且被权威认可：《中国药典》自2010年版起已收载拉曼光谱法作为指导原则，并在2015年及2020年版中将其升级为通则方法（0421），标志着该技术在药品质量控制领域的正式地位。

预研数据表明，拉曼光谱法检测DMSO残留，其检测限可达0.025%，远低于药典规定