生殖器疱疹和尖锐湿疣检测技术.pptxVIP

生殖器疱疹和尖锐湿疣检测技术;一、生殖器疱疹;单纯疱疹病毒（HSV）引起

单纯疱疹病毒（HSV)，大小：150-200nm；DNA病毒；20面核衣壳；胞膜；衣壳蛋白

感染生殖器、肛门

复发，无彻底治愈的方法

具有嗜感觉神经节，形成潜伏感染状态

检测方法：细胞培养、核酸检测、直接免疫荧光、型特异性血清型抗体检测法;;HSV有10-11种特异性糖蛋白抗原

是细胞和体液免疫的主要靶标

也是预防和治疗HSV感染的亚单位疫苗或DNA疫苗的候选基因

gB,gC,gD,gE,gF,gG,gH,gI,gJ,gL,gM

其中gG是型特异性糖蛋白，具有型特异性抗原决定簇，诱导产生特异性抗体

HSV抗原型：HSV1和HSV2;;;HSV-2引起的生殖器和口腔疱疹;;HSV-1和HSV-2同源性高达50％

感染方式与临床表现不同

?HSV-1：主要上半身皮肤和粘膜（口唇、咽、眼等）疱疹，严重者疱疹性脑炎，STI达10-40%；

?HSV-2：主要生殖器感染（80％），偶可发生口腔及其周围感染。

?HSV-1复发少，HSV-2复发高;HSV感染的临床表现

一、疱疹：10-20%

1.初发疱疹：

原发：无病史且HSV1/2抗体阴性

非原发：一种抗体阳性，而引起疱疹病毒型抗体阴性。

原发与非原发临床不能区别，必须实验室鉴别。

第一次症状（复发）：血清学阳性但以前未出现疱疹

2.复发疱疹：有典型病史，HSV2较1复发率高，男比女高

二、潜伏感染：80-90％HSV感染;来自无症状的排毒者（最常见）

70％HSV2感染来自性伴无症状排毒期。

通常有症状期性活动较少。

多数病例否认与感染者接触的病史。

与传染性溃疡接触（排毒达高峰，传染性最强）

母婴传播：分3个阶段

子宫内：经胎盘或宫颈上行感染，导致胎儿早产、流产、畸形、死亡。

围产期：占85％，经产道40-60％机会被感染

出生后：接触外部HSV传染源，如母亲口腔感染等。;潜伏活动导致长期持续感染

新生儿疱疹发病率和死亡率严重

HIV感染协同因素

80-90％HSV感染为潜伏感染;（一）细胞培养法;操作步骤：

单层细胞制备：24孔板培养，长成单层细胞备用（常用细胞株为Vero,Hela,BHK)

标本接种：接种0.2ml，培养3~7日

CPE(cytopathiceffect)观察：接种后，每日观察

病毒传代：至少50%以上细胞出现CPE后，收集培养物，再次接???至新鲜细胞中。

鉴定和分型：50%以上细胞出现CPE后，收集感染细胞和培养物，离心后，沉淀用免疫荧光或酶免试验鉴定。;结果判读：

观察CPE:连续7日观察，细胞一般在2~4日出现病变，变圆，肿胀和气球样变，可见融合细胞和多核巨细胞，初步判定HSV阳性。

用免疫荧光法对HSV进一步鉴定和分型。

结果报告：

出现CPE:“单纯疱疹病毒分离可疑”

鉴定后：“单纯疱疹病毒I型（II型）生长”

临床意义：

细胞培养法是“金标准”

用免疫荧光法对HSV进一步鉴定和分型;注意事项:

选择敏感细胞系，且细胞应为活力强的幼龄细胞

取材时不用消毒剂和润滑剂

尽量取水泡液或脓疱液进行接种培养

取材后尽快接种，24h不能接种，存放于-70℃

其他疱疹病毒如水痘，带状疱疹病毒感染也可以引起类似的CPE，因此需要进一步鉴定;HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒（HumanPapillomavirus18或HPV18）转型成癌细胞的，而且和正常子宫颈细胞有许多不同。;Hela细胞感染HSV-2:A正常细胞；B:HSV-2感染细胞。;基本原理：

HSV抗体(标记FITC)→标本HSV→荧光显微镜观察

标本采集：

细胞培养标本：收集细胞培养阳性标本，可作细胞爬片。

病损标本：收集病损部位基底部细胞

仪器设备：荧光显微镜；HSV(I/II)mAb;PBS溶液

操作步骤：

固定：冷丙酮（-20℃）或甲醇固定标本10min

洗涤：PBS洗3次，或自然干燥

染色：双份标本中滴加HSV-1和HSV-2荧光抗体工作液，37℃湿盒30min

洗涤：PBS,双蒸水

封片镜检：90%甘油+10%PBS;结果判读：

阳性、阴性对照结果正常

阳性标本为亮绿色荧光

结果报告：

阳性：见到上述荧光

阴性：未见到上述荧光

临床意义：

一般用于HSV分离培养阳性标本的鉴定和分型

注意事项:

每批试验均设置对照

高质量荧光显微镜和技术熟练操作人员

取材是应避免出血，以免影响结果判断

直接皮损标本：容易脱片;HCEinoculatedwithahighviralloadclinicalspecimenpositiveforHSV-1.Notethepresenceofman