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T7RNA聚合酶的体外转录：
5XTxnBuffer:
400mMHEPES‑KOH,
pH7.510mM精胺200
mMDTT125mMMgCl2
Th基本的转录缓冲液如上所述。可选成分如下所列w:
在1X浓度下：50mg/mL
PEG‑80002.5U/mL无机焦磷酸酶
在40mM1X浓度下，pH7.9的Tris缓冲液也可以很好地替代HEPES，但
HEPES可能更高的产物产量（S.Li，未的观察结果）。无机焦磷酸酶可
以产生的产物，因为它将可能导致产物抑制的无机磷酸盐转化为磷酸盐。
PEG‑8000也可能增加产量，并会产生的白色沉淀物。
5XNTP缓冲液：
UTP(Sigma,编号U6750,$126)
GTP(Sigma,编号G8877,$348)
CTP(Sigma,编号C1506,$261)
ATP(Calbiochem)
每种NTP20mM，pH8.0
55.4mgUTP
58.7mgGTP
55.1mgATP
52.1mgCTP
至5mL
用约400uL1MNaOH调节pH至~8（使用pH试纸检查）
NTPs从Sigma，并且是钠盐。每种NTP的最终浓度为4mM。使用更高
浓度的NTP可以产生的产物，但钠反离子通常会导致抑制。使用锂或
Tris‑NTP盐可以使NTP浓度增加到20mM（参见Ambion的专利‑
MExn套件中的技术）。NTP在溶于水时需要中和。
RNASecure:
InvitroTranscriptionbyT7RNAPolymerase:
5XTxnBuffer:
400mMHEPES-KOH,pH7.5
10mMspermidine
200mMDTT
125mMMgCl2
Thebasictranscriptionbufferisasabove.Optionalcomponentsarelistedbelow:
At1XConcentration:
50mg/mLPEG-8000
2.5U/mLInorganicPyrophosphatase
ATris-basedbufferat40mM1Xconcentration,pH7.9alsoworkswellinsteadofthe
HEPES,howeverHEPESmaygiveteryieldsofproduct(S.Li,unpublished
observations).InorganicPyrophosphatasemayyieldmoreproductsinceitconverts
inorganicphosphate,whichcanresultinproductinhibition,tophosphate.PEG-8000can
alsoresultinincreasedyieldsandwillyieldmorewhiteprecipitate.
5XNTPBuffer:
UTP(Sigma,Cat#U6750,$126)
GTP(Sigma,Cat#G8877,$348)
CTP(Sigma,Cat#C1506,$261)
ATP(Calbiochem)
20mMeachNTP,pH8.0
55.4mgUTP
58.7mgGTP
55.1mgATP
52.1mgCTP
to5mL
pHw/ca.400uL1MNaOHtopH~8(checkbypHpaper)
NTPsarepurchasedfromSigmaandaresodium
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