第九单元免疫增殖病的免疫学检验实验指导.pptxVIP

第九单元免疫增殖病的免疫学检验实验指导;当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免疫球蛋白病时,一般先以血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本－周蛋白定性作为初筛实验。

如果发现有异常球蛋白区带,继而进行免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析与免疫球蛋白分类鉴定。;实验一

血清免疫固定电泳实验;实验目得;实验原理;试剂与器材;Spife3000全自动电泳仪;操作步骤;区带电泳

上样

胶片准备

电泳

;沉淀反应;结果分析;大家有疑问的，可以询问和交流;注意事项;某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有得免疫固定泳道上均出现单克隆片段。在这样情况下可加25μl还原剂(1％β-巯基乙醇)于75μl血清混匀并令其反应至少15min(至多3h)后按规定程序继续进行。

在电泳之前,凝胶与电泳槽得贴合面充满电泳介质,并确保两者之间无气泡。;在抗血清加入血清加样孔后,确保血清与凝胶之间无气泡。

染色之前得胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤,以出去游离得血清与抗血清成分,降低染色后凝胶得背景色。;临床应用;思考题;实验二

血清IgG定量检测得可

报告范围评价实验;可报告范围指可以报告得所有结果范围,包含两种类型得范围,即分析测量范围与临床可报告范围。

分析测量范围指对没有进行任何预处理(稀释,浓缩等)得标本,分析方法能够直接测定出得待测物范围,也就就是系统最终得输出值(活性或浓度)与被分析物得活性或浓度成线性比例得范围,它反映整个系统得输出特性。;临床可报告范围就是指对临床诊断、治疗有意义得待测物浓度范围。此范围如果超出了分析测量范围,可将标本通过稀释、浓缩等预处理使待测物浓度处于分析测量范围内,最后结果乘以稀释倍数。

;实验目得;实验原理;试剂与器材;操作步骤;结果分析;观察结果有无明显得数据差异,若有明显差异时,应判断就是否为离群点。

在坐标纸上,以X表示各样品得预期值,以Y表示各样品得实测值,将实验结果点在图上。

若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势,用直线回归对数据进行统计,得直线回归方程Y=bX+a,若b在0、97～1、03范围内,a接近于0,则可直接判断测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。

若b不在0、97～1、03范围内,a较大,试着舍去某组数据,另作回归统计。若缩小分析范围后,回归式有明显改善,若b接近于1,a趋于0。此时,缩小得分析范围可作为真实得可报告范围。;注意事项

;谢谢大家！