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高效液相色谱日常使用、维护及常见色谱问题

单击此处添加标题单击此处添加标题单击此处添加标题010203目录/Contents高效液相色谱仪的一般使用方法液相维护常见色谱问题

1高效液相色谱仪的一般使用方法

单击编辑标题单击此处可编辑内容，根据您的需要自由拉伸文本框大小高效液相色谱仪的一般使用方法砂芯过滤装置针头过滤器1.操作前准备（1）准备所需的流动相，根据需要选择合适的滤膜（≤0.45μm）过滤流动相，超声脱气20分钟。（2）根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。（3）配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（4）检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

高效液相色谱仪的一般使用方法溶剂及样品的准备过滤：目的是防止固体颗粒损伤仪器或柱头;未经过滤的溶剂或者溶剂瓶中生长微生物，都会降低溶剂入口过滤头的寿命，并影响泵的性能，一般要求两天过滤一次。注意：过滤水相或有机相应该选用不同的滤膜.聚四氟乙烯几乎可以过滤所有的溶剂、酸和碱尼龙66可以和大多数的有机物、水相容，但是建议不要用于强酸、二氯甲烷和DMF纤维素滤膜用于水相

高效液相色谱仪的一般使用方法溶剂脱气的方法氦气脱气真空脱气回流加热脱气超声脱气(最为常用)避免使用的溶剂卤化物碱金属溶液及相应的酸溶液高浓度的无机酸如硝酸、硫酸能形成自由基的试剂及其混合物四氯化碳和异丙醇或THF混合液含强络合剂的溶液

高效液相色谱仪的一般使用方法2.开机依次接通并打开稳压器电源、控制器、主机、检测器、泵电源，待自检通过。3.排空操作打开泵排空阀（逆时针90°以上，但小于180°），按[Purge]键，泵开始排空运行。4.检查流动相入口Teflon管路没有气泡后，再按[Purge]键停止排空。顺时针关闭排液阀。5.在计算机中双击Labsolution图标，进入工作站。输入实验信息并设定各项方法参数（如流速、检测波长、时间、温度等）后，保存方法文件，然后单击“下载”，将设置的色谱参数传输给仪器主机。

高效液相色谱仪的一般使用方法6.色谱柱的平衡使用5-10倍柱体积对色谱柱进行平衡，一般冲洗至基线漂移0.01mv/min，噪声0.001mv时，可认为系统已达到平衡状态(一般需30分钟)，可以进样进行样品分析、采集样品数据、计算结果并打印图谱。7.进样（六通阀）搬到LOAD位置时进针（在此位置将微量进样器中的溶液注射到定量环）→打完针后搬到INJECT位置进样→取下微量进样器。进样针内不能有气泡；转动阀时速度要快；部分装液法（最多75%）和完全装液法（3~5倍）；结束后冲洗。

高效液相色谱仪的一般使用方法8.冲洗色谱柱：分析完毕后关闭检测器，用流动相冲洗一段时间（溶剂量为10～15倍的柱体积），然后再用有机溶剂冲洗。流动相中含有酸、缓冲盐、离子对时，使用完后应先用无盐流动相（10%甲醇/乙腈）冲洗40~60min。之后逐步增加有机溶剂比例进行冲洗（保证最后管路和色谱柱中充满90%以上的甲醇或乙腈）。9.关闭仪器和电脑。

2液相维护

液相维护1.管路过滤器的检查及清洗，吸滤头及在线过滤器先用异丙醇超声5~15min,然后用甲醇超声5~15min，随后用双蒸水超声5~15min，再用甲醇清洗超声5~15min，安装。2.液相的清洗，一般使用4周以后，将系统在没有连接色谱柱的条件下，依次用甲醇、异丙醇、甲醇、50%甲醇、甲醇各冲洗1h。

3常见色谱问题

常见色谱问题输送流动相的管路中不断有气泡生成吸滤头堵塞材料：不锈钢烧结，孔径10μm措施：用异丙醇或5%稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗（经验：可以先用甲醇或乙腈超声波清洗，看看有没有改善）

常见色谱问题压力偏高系统堵塞：逐段排查，确定哪个部件堵。按以下步骤排查：Step1：换下色谱柱接两通走纯水看压力情况，以0.5ml/min接两通压力走纯水观察压力。0.1MPa，色谱柱堵,0.1MPa,继续排查。Step2：拧下两通接检测器的那一端柱接头，观察压力变化情况。

若压力迅速下降，则为流通池堵、连接色谱柱与流通池之间的管线堵、废液管堵（断开流通池或废液管进行排查），压力不变则继续排查。Step3：打开排空阀观察压力，若压力偏高则滤芯堵；若压力不变则拔掉连接泵与六通阀之间的管线，排查连接管线和六通阀是否堵塞。管线堵更换或高流速冲洗即可。

常见色谱问题压力偏低Q1：漏排查办法：逐段检漏，确定哪个部件漏液。Q2：色谱柱失效，固定相已被冲散，导致