高效液相色谱日常使用、维护及常见色谱问题.pdfVIP

高效液相色谱

日常使用、维护及常见色谱问题

目录/Contents

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01高效液相色谱仪的一般使用方法

液相维护

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常见色谱问题

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高效液相色谱仪的

一般使用方法

•高效液相色谱仪的一般使用方法

1.操作前准备

（1）准备所需的流动相，根据需要选择合适的滤膜（≤0.45μm）过滤流动相，超声脱气

20分钟。

（2）根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

（3）配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

（4）检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

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针头过滤器砂芯过滤装置

•高效液相色谱仪的一般使用方法

溶剂及样品的准备

过滤：目的是防止固体颗粒损伤仪器或柱头;未经过滤的溶剂或者溶剂瓶中生长微生物，

都会降低溶剂入口过滤头的寿命，并影响泵的性能，一般要求两天过滤一次。

注意：过滤水相或有机相应该选用不同的滤膜.

•聚四氟乙烯几乎可以过滤所有的溶剂、酸和碱

•尼龙66可以和大多数的有机物、水相容，但是建议不要用于强酸、二氯甲烷和DMF

•纤维素滤膜用于水相

•高效液相色谱仪的一般使用方法

溶剂脱气的方法避免使用的溶剂

•氦气脱气•卤化物碱金属溶液及相应的酸溶液

•真空脱气•高浓度的无机酸如硝酸、硫酸

•回流加热脱气•能形成自由基的试剂及其混合物

•超声脱气(最为常用)•四氯化碳和异丙醇或THF混合液

•含强络合剂的溶液

•高效液相色谱仪的一般使用方法

2.开机依次接通并打开稳压器电源、控制器、主机、检测器、泵电源，待自检通过。

3.排空操作打开泵排空阀（逆时针90°以上，但小于180°），按[Purge]键，泵开始排

空运行。

4.检查流动相入口Teflon管路没有气泡后，再按[Purge]键停止排空。顺时针关闭排液阀

。

5.在计算机中双击Labsolution图标，进入工作站。输入实验信息并设定各项方法参数（

如流速、检测波长、时间、温度等）后，保存方法文件，然后单击“下载”，将设置的色谱

参数传输给仪器主机。

•高效液相色谱仪的一般使用方法

6.色谱柱的平衡使用5-10倍柱体积对色谱柱进行平衡，一般冲洗至基线漂移

0.01mv/min，噪声0.001mv时，可认为系统已达到平衡状态(一般需30分钟)，可以

进样进行样品分析、采集样品数据、计算结果并打印图谱。

7.进样（六通阀）搬到LOAD位置时进针（在此位置将微量进样器中的溶液注射到

定量环）→打完针后搬到INJECT位置进样→取下微量进样器。进样针内不能有气泡；转

动阀时速度要快；部分装液法（最多75%）和完全装液法（3~5倍）；结束后冲洗。

•高效液相色谱仪的一般使用方法

8.冲洗色谱柱：分析