细胞生物学研究方法：显微成像技术及其应用.pdfVIP

细胞生物学研究方法

逸仙班孙宏伟

细胞生物学是实验科学，大部分成果是通过实验的方法获得，本章对细胞生物学进行简要

介绍。

一、显微成像技术

1.显微镜成像原理

1)显微镜成像原理与成像的基本要素

原理：照明系统发出的光线或通过样品时，与样品发生相互作用，其被改

变的特征被肉眼观察或通过探测器检测而成像。

基本要素：（1）照明系统；（2）样品；（3）聚焦和成像的透镜系统。

2)相关参数

a)焦距：透镜平面到焦距的距离。

b)孔径角：孔径角是从焦点朝着透镜望去，孔径所占的角度。

c)分辨率：在25cm明视距处，能清楚地分辨出备检物体细微结构最小间隔的能

力，称为分辨率。可以用如下计算：分辨率r=0.61λ/nsinα，其中n

为折射率，λ为照明源的波长，α表示样品对物镜孔径角的半角。

d)分辨极限：一定波长的射线不能用以探测比它本身波长短得多的结构细节，

这显微镜的一个基本限度。

e)放大率：最终成像的大小与原物体大小的比值成为放大率，总放大率=物镜

放大率×物镜放大率。

2.常用显微镜

1)光学显微镜

a)常用光学显微镜简介

光学显微镜是利用光线照明，使微小的物体形成放大影响的仪器。主要有以

下几种：

①普通双筒显微镜

②荧光显微镜：利用紫外线为光源照射样品，使之发生荧光，然后在显微

镜下观察物体的形态及其所在位置。

③相差显微镜：利用光的衍射和特性，使相位差变成振幅差，表现为

明与暗的对比，使肉眼得以观察到无色透明物体中的细节。

④暗视野显微镜：使用特殊的照明方法，使光线不能直接进入物镜和目镜，从

而在观察样品时不能直接看到照明光线，只能看到被检物体所反射的光

线，从而使备检物体在的视野中形成明亮的像。

⑤倒置显微镜：普通光学显微镜的倒置。

b)光学显微镜的样品技术

①样品处理基本技术

i.样品的固定：杀死细胞，稳定细胞的化学成分，保证不会再进一步

处理和切片时不会受到破坏。

ii.包埋和切片：用液态石蜡或者树脂，将样品包埋成块，便于切片。

iii.染色：给细胞不同组分带上可区分的颜色特征。

②自显影技术：用感光胶片测定细胞某些被性标记的物质在

细胞固定时的位置。

2)电子显微镜

a)常用电子显微镜简介

①透射电子显微镜：让样片而成像，包括真空系统、电子光学

系统和电子学系统。

②扫描电子显微镜：利用二次电子信号观察样品的表面形态。

③扫描透射电镜：兼具透射电子显微镜和扫描电子显微镜的功能。

④高压电镜：与透射电子显微镜基本相似，但电压特别高。

b)电子显微镜的样品制作技术