DB14∕T 1177-2016 大田转基因棉花外源序列PCR 检测规程.docxVIP

ICS65.020.20B05

DB14

山西省地方标准

DB14/T1177—2016

大田转基因棉花外源序列PCR检测规程

2016-03-30发布2016-05-30实施

山西省质量技术监督局发布

I

DB14/T1177—2016

目□□次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂仪器材料 2

5样品DNA提取 2

6PCR检测基因 4

7PCR反应程序及电泳检测 4

8样品分析结果 5

9检测档案记录 5

附录A（规范性附录）检测引物 6

附录B（资料性附录）转基因棉花检测鉴定结果 7

II

DB14/T1177—2016

前□□言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由山西省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：山西省农业科学院棉花研究所、运城学院、山西三联现代种业科技有限公司。

本标准主要起草人：马燕斌、张树伟、王霞、王新胜、吴霞、李燕娥、张相斌、杨帆、邵新胜、韩青龙、马纪农。

DB14/T1177—2016

1

大田转基因棉花外源序列PCR检测规程

1范围

本标准规定了大田转基因棉花外源序列PCR检测的术语和定义、试剂仪器材料、样品DNA提取、PCR检测基因及序列、PCR反应程序及电泳检测、样品分析结果以及检测档案记录。

本标准适用于大田种植的山西省审定棉花品种中转外源序列相关成份的检测鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4407.1经济作物种子第1部分：纤维类

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

NY/T673转基因植物及其产品检测抽样

NY/T1297农作物品种审定规范棉花

NY/T2162棉花抗棉铃虫性鉴定方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

转基因棉花

棉花自然遗传存在的基因组序列除外，另包含有经人工分离或修饰的基因序列，该序列是通过生物技术手段导入并整合到棉花基因组中，以控制某一功能或性状发生为目的，最终导致棉花基因组序列发生变化的棉花植株、棉花种子及作为亲本遗传产生的后代。

3.2

外源基因

在转基因棉花中，棉花自然遗传进化存在的基因除外，包含有经过生物技术手段导入的、人工分离修饰得到的基因序列，统称为外源基因。经人工分离修饰基因来源可包括棉花在内的任何生物，该基因通常以控制某一功能或性状发生。

3.3

外源序列

DB14/T1177—2016

2

在转基因棉花中，棉花自然遗传进化存在的基因组核苷酸序列除外，包含有经过生物技术手段导入的、人工分离修饰得到的基因组核苷酸序列，统称为外源序列，该人工分离修饰基因组核苷酸序列可包括棉花在内的任何生物。通常包括有基因、调控基因表达的启动子、终止子、相关的常规调控序列区域以及非功能序列组成等。

3.4

内标基因Sad1

Stearoyl-acylcarrierproteindesaturase英文的缩写，指棉花自然遗传存在的基因序列，编码棉花硬脂-酰基载体蛋白脱饱和酶的基因。

3.5

PCR

PolymeraseChainReaction英文的缩写，即聚合酶链式反应；是一种基于DNA双螺旋分子的特点，利用核苷酸扩增仪通过一个包括DNA序列变性、退火引物与模板链结合、目标序列延伸的不断循环的过程来特定扩增目标DNA片段的分子生物学技术。

4试剂仪器材料

4.1试剂

4.1.1DNA提取及电泳常规用试剂

葡萄糖、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、β-巯基乙醇、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、盐酸（Hcl）、琼脂糖

4.1.2PCR扩增常规试剂

Taq酶、dNTP、loadingbuffer

4.2仪器

电子称、移液枪、高速离心机、水浴锅、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、振荡器

4.3材料

待检测的棉花材料；阴性对照非转基因棉花样本，阳性对照为转基因棉花样本。取样标准为新生顶端幼嫩新叶0.2g～0.4g，取样后按名称标记，冰上保存，-80℃冰箱保存备用。

5样品DNA提取

5.1棉花DNA提取液配制

5.1.1