基因工程概述与基本操作程序.pdfVIP

第1节工程概述

【学习目标】

1、说出工程的概念（A）

2、简述工程的诞生历程（A）

3、说出重组技术所需的三种工具的作用（A）

4、简述工程基本操作程序的四个步骤（B）

【基础梳理】

一、工程的概念

是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的进行改造和重新组合，

然后导入受体细胞并使重组在受体细胞中表达，产生人类所需的产物的技术。

（1）操作环境：生物体外

（2）操作对象：

（3）操作水平：分子水平

（4）基本过程：剪切→拼接→导入→表达

（5）结果：人类需要的产物

二、工程的工具及作用

（一）限制性内切酶（简称限制酶）“分子手术刀”

1、：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

2、作用：能够识别双链分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的

两

个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

3、特点:具有专一性，表现在两个方面：

①识别双链分子的某种特定的核苷酸序列。

②切割特定序列中的特定位点。

4、结果：经限制酶切割产生的片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

例1、下列有关工程中限制内切酶的描述，错误的是（）

A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列

B．限制性内切酶的活性受温度的影响

C．限制性内切酶能别和切割RNA

D．限制性内切酶可从原核生物中提取

（二）连接酶“分子针线”

1、分类：根据酶的不同，可分为E·coli连接酶和T4连接酶两类

2、作用：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

【疑难解析】

1、两种连接酶(E·coli连接酶和T4连接酶)的比较：

（1）相同点：都缝合磷酸二酯键

（2）区别：E．coIi连接酶于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接；

T连接酶于T噬菌体能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。

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2、连接酶与聚合酶作用的比较

连接酶聚合酶

连接的

双链单链

不同点

模板不要模板要模板

单个脱氧核苷酸加到已存在的单链

连接的对象2个片段

片段上

作用实质形成磷酸二酯键

相同点

化学本质蛋白质

(三)载体“分子车”

1、载体的作用：载体是工具，在操作过程中，使用载体有两个目的：一是用

它作为运载工具，将目的送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的进行

大量。

2、载体必须具备三个条件：

（1）能在受体细胞中并稳定保存。

（2）具有一至多个限制酶切割位点，供外源片段。

（3）具有某些标记，以便进行筛选。

3、载体的种类：质粒、噬菌体和动、植物等。

最早应用最常应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状