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第2课时微生物的选择培养和计数（2月4号作业）

一、选择培养基和微生物的选择培养

1．选择培养基(1)概念：

(2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基是以为唯一氮源，按物理性质归类为。

特别提醒原则上选择培养基只能，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物，还需进一步验证。

2．微生物的选择培养——稀释涂布平板法

(1)系列稀释操作

①编号为1×102～1×107试管中分别盛有9mL无菌水。

②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。

③取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。

(2)涂布平板操作

取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培养基表面

↓

涂布器消毒：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中

↓

涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布

↓

涂布平板：用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀

特别提醒取出涂布器时，应避免酒精滴落；燃烧后的涂布器，应后再进行涂布。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入。

下面是筛选分解尿素的细菌培养基的配方，请分析：

KH2PO4

1.4g

Na2HPO4

2.1g

MgSO4·7H2O

0.2g

葡萄糖

10.0g

尿素

1.0g

琼脂

15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL

(1)从物理性质看，该培养基属于，从功能上看属于。

(2)该培养基是如何实现对分解尿素的细菌的筛选的？

(3)若要证明所用的选择培养基没有受到环境污染？操作步骤是？

二、微生物的数量测定

1．统计菌落数目方法：。常用来统计活菌数目的方法是。

2．稀释涂布平板法

(1)统计依据：。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

(2)操作①同一稀释度下，应至少对个平板进行重复计数，然后求出平均值。

②为保证结果准确，一般选择菌落数为的平板进行计数。

③统计的菌落数往往比活菌实际数目。

3．显微镜直接计数法：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，缺点是。

4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

Ⅰ.实验设计

(1)土壤取样①土壤要求：。②取样部位：。

(2)样品的稀释

测定土壤中的数量，一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养，当第一次做这个实验时可以将稀释的范围放宽一点。

(3)微生物的培养与观察

①培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的。细菌一般在的温度下培养d

②观察

a．观察方法：每隔统计一次菌落数目，选取记录作为结果。

b．记录菌落的特征：包括等。

Ⅱ.操作提示

(1)无菌操作①取土样的用具在使用前都需要。②实验操作均应在进行。

(2)做好标记：本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，最好在使用前。例如，在标记培养皿时应该注明等。

(3)制定计划：对于耗时较长的生物实验，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。

甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在