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猪链球菌2型fbps基因突变株：构建、特性与致病关联探究

一、引言

1.1研究背景

猪链球菌（Streptococcussuis）作为一种重要的人兽共患病病原菌，严重威胁着全球养猪业的健康发展以及人类的公共卫生安全。在众多血清型中，猪链球菌2型（Streptococcussuistype2，SS2）致病性强且流行最为广泛，是导致猪链球菌病的主要血清型之一。猪感染SS2后，常引发脑膜炎、化脓性肺炎、心肌炎以及败血症等多种严重疾病，致使猪只生长发育受阻、病死率升高，给养猪业带来巨大的经济损失。例如，在我国1998年江苏和2005年四川分别暴发的人感染猪链球菌2型疫情中，不仅造成大量猪只死亡，还导致多人感染发病，出现“中毒性休克综合征”，病死率高达60％-80％，引起了全世界的广泛关注。

SS2的致病性与多种毒力因子密切相关，包括荚膜多糖（CPS）、溶菌酶释放蛋白（MRP）、胞外蛋白因子（EF）、溶血素（SLY）、粘附素等。这些毒力因子在细菌的粘附、侵袭、免疫逃逸以及对宿主细胞的损伤等过程中发挥着关键作用，共同构成了SS2复杂的致病机制。其中，纤连蛋白结合蛋白（Fibronectin-bindingprotein，FBPS）作为一种新近鉴定的粘附素，在SS2致病过程中扮演着独特而重要的角色。

FBPS能够介导SS2与纤连蛋白的特异性结合，而纤连蛋白广泛存在于宿主细胞表面和细胞外基质中。通过这种结合，SS2得以更有效地粘附于宿主组织，并进一步侵袭宿主细胞，为细菌在宿主体内的定植、繁殖和扩散创造条件。研究表明，SS2与宿主细胞的粘附是感染的起始关键步骤，FBPS在此过程中的作用不可或缺，其对SS2致病性的影响不容小觑。深入研究FBPS基因，不仅有助于揭示SS2与宿主相互作用的分子机制，还能为阐明SS2的致病机理提供关键线索，具有重要的理论意义。

此外，随着养猪业规模化、集约化的快速发展，猪链球菌病的防控形势愈发严峻。目前，虽然在疫苗研发和抗生素应用等方面取得了一定进展，但由于SS2的抗原多样性和耐药性问题日益突出，现有的防控措施仍存在诸多局限性。对FBPS基因的深入研究，有望为开发新型、高效的疫苗和防控策略提供新的靶点和思路，从而为猪链球菌病的有效防控提供有力支持，具有重要的实践意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过构建猪链球菌2型fbps基因突变株，深入探究该基因对菌株生物学特性的影响，包括生长特性、粘附能力、侵袭能力以及毒力等方面。具体而言，期望明确fbps基因在猪链球菌2型致病过程中的具体作用机制，揭示其与其他毒力因子之间的相互关系，为全面解析猪链球菌2型的致病机制提供重要的实验依据和理论基础。

从实际应用角度来看，本研究的成果对于猪链球菌病的防控具有重要意义。一方面，明确fbps基因的功能后，可将其作为潜在的药物靶点，开发新型抗菌药物，提高对猪链球菌病的治疗效果；另一方面，基于对fbps基因的认识，有望优化现有疫苗设计，或开发以FBPS为基础的新型亚单位疫苗，增强疫苗的免疫保护效果，从而为养猪业的健康发展和公共卫生安全提供更有效的保障。

1.3研究方法与技术路线

本研究综合运用多种分子生物学技术和微生物学方法。首先，采用同源重组技术构建猪链球菌2型fbps基因突变株。通过PCR扩增fbps基因的上下游同源臂，同时扩增筛选标记基因（如氯霉素抗性基因），利用重叠PCR将三者连接，构建重组敲除载体。将该载体电转化至猪链球菌2型感受态细胞中，通过温度筛选和抗性筛选，获得fbps基因缺失的突变株，并通过PCR和测序进行验证。

随后，对突变株和野生株的生物学特性进行系统研究。在生长特性方面，通过绘制生长曲线，比较两者在不同培养基和培养条件下的生长速率和生长周期；在粘附能力和侵袭能力方面，利用细胞模型（如猪肺泡巨噬细胞、猪肾细胞等），采用粘附实验和侵袭实验，检测并分析突变株与野生株对宿主细胞粘附和侵袭能力的差异；在毒力方面，以动物模型（如小鼠、仔猪等）进行感染实验，观察动物的发病症状、死亡率等指标，评估突变株毒力的变化。

技术路线如图1-1所示：首先进行菌株和质粒准备，接着构建重组敲除载体，经电转化、筛选和鉴定获得突变株；然后分别对突变株和野生株开展生长特性、粘附与侵袭能力以及毒力等生物学特性研究；最后对实验数据进行统计分析，总结研究结果并得出结论。

[此处插入技术路线图]

二、猪链球菌2型及fbps基因概述

2.1猪链球菌2型简介

2.1.1分类地位与生物学特性

猪链球菌2型在分类学上属于链球菌科（Streptococcaceae）、链球菌属（