CN111316917A 一种凤凰木人工种子的制作方法 （西安艾默农林生物技术有限公司）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN111316917A

(43)申请公布日2020.06.23

(21)申请号202010293167.7

(22)申请日2020.04.15

(71)申请人西安艾默农林生物技术有限公司地址710086陕西省西安市沣东新城协同

创新港银河A座5层

(72)发明人王小帆史玮

(51)Int.CI.

A01H4/00(2006.01)

权利要求书2页说明书11页

(54)发明名称

一种凤凰木人工种子的制作方法

(57)摘要

CN111316917A本发明公开了一种凤凰木人工种子的制作方法，具体步骤为：采集当年生种子，然后对种子进行消毒处理，消毒后的种子接种到培养基中培养获得凤凰木小苗，剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种胚，另配制人工种皮和人工胚乳：0.2-0.3mol/L氯化钙溶液中加入0.3%多菌灵粉剂，再加入0.1mg/L青霉素，获得A溶液。2%-4%海藻酸钠溶液中加入3-5mg/L的6-BA和8-12mg/L的NAA,获取B溶液，最后采用水凝胶法包埋人工种胚获得人工种子。本发明生产的人工种子体积小，运输及保存方便、成本低廉，且能大幅度提高

CN111316917A

CN111316917A权利要求书1/2页

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1.一种凤凰木人工种子的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；

步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制MS培养基和激素母液；

步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子进行常规消毒处理，首先自来水冲洗40-80min,再用60%-80%的酒精浸泡冲洗5-15min,用无菌水冲洗2-4次，最后用6%-10%的次氯酸钠溶液浸泡冲洗5-10min,在超净工作台上用无菌水冲洗4-6次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡；

步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用30-60mg/L的赤霉素溶液浸泡20-40min,用浓硫酸拌种20-40min再用清水清洗，然后接种在添加有琼脂和激素的MS培养基中培养，所述培养基的配方为：MS+6-BA8-12mg/L+NAA0.5-2mg/L;

步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养30-40天后，凤凰木小苗生长到高度为8-10厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种胚；

步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.2-0.3mol/L氯化钙溶液中加入0.3%多菌灵粉剂，再加入0.1mg/L青霉素，获得A溶液；

在预先配制的2%-4%海藻酸钠溶液中加入3-5mg/L6-BA和8-12mg/LNAA,获得半凝胶状态的B溶液；

步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入B溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡2-5min,然后用滴管吸取混合有B溶液的人工种胚滴入A溶液内浸泡10-20min,形成人工种子后用无菌水冲洗2-4次，吸取表面水分得到人工种子。

2.根据权利要求1所述的凤凰木人工种子的制作方法，其特征在于，步骤2中实验室和实验用具的消毒方法为：实验室紫外消毒30min,用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。

3.根据权利要求1所述的凤凰木人工种子的制作方法，其特征在于，步骤2中配制的MS培养基和激素母液消毒方法为：配制好的MS培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min;配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。

4.根据权利要求1所述的凤凰木人工种子的制作方法，其特征在于，步骤3中所述种子预先在常温自来水中浸泡2小时，获得种皮被泡胀的种子，然后再进行常规消毒处理。

5.根据权利要求1所述的凤凰木人工种子的制作方法，其特征在于，步骤3中种子消毒处理方法为：首先自来水冲洗60min,再用70%酒精浸泡冲洗10min,用无菌水冲洗3次，最后用8%次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min,在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。

6.根据权利要求1所述的凤凰木人工种子的制作方法，其特征在于，所述步骤4种子接种前在超净工作台用45mg/L的赤霉素溶液浸泡30min,用98%浓硫酸拌种30min再用清水清洗，然后接种在添加有琼脂和激素的MS培养基中培养。

7.根据权利要求1所述的凤凰