基于组学探究荧光假单胞菌的降解偏好性及溶磷机制.pdfVIP

摘要

磷是植物生长所必需的营养元素之一，土壤缺磷导致植物正常生长受到抑制，

并影响植物对其他元素的吸收；土壤中的磷大部分以难溶的矿物形式存在，植物

难以直接吸收利用，溶磷菌的发现为解决土壤中有效缺磷问题提供了新的途径，

在提高土壤磷利用效率、促进作物生长发育以及帮助抗逆方面发挥着多功能作用。

本研究利用不同的选择性培养基（无机磷磷酸钙、有机磷植酸钙培养基）分

离土壤中不同功能的溶磷细菌；利用“透明圈法”和“钼锑抗比色法”定性与定量筛

选溶磷能力高的溶磷细菌；利用细菌16SrRNA扩增确定菌株的分类。为确定菌

株发挥溶磷作用的功能基因，运用PCR手段检测筛选得到的菌株体内的部分基

因组成情况。对荧光假单胞菌的基因组进行分析基因组编码了菌株利用氮源与碳

源的相关功能蛋白，对基因组中编码的蛋白酶与木质纤维素降解酶的种类与数量

进行分析，能够反映菌株对蛋白或生物质多糖类底物的偏好性与降解潜能，为后

续实验选择最适底物阐明菌株的降解系统提供基础。根据生物信息学分析结果表

明荧光假单胞菌含有丰富的蛋白酶基因，这些基因的转录与表达可能与底物种类

等环境信号密切相关。因此，以基因组分析为基础，选择荧光假单胞菌在有机磷

和无机磷培养基的最适诱导氮源，通过测定理化性质和可溶性磷含量筛选出最适

培养条件。得出以下结论：

（1）利用不同筛选培养基从消落区土壤中共分离出9株不同功能的溶磷菌株，

其中变形菌门占比达到85%。溶解磷酸钙的菌株均是克雷伯菌属（Klebsiella）。

（2）PCR检验结果发现大部分溶磷菌株存在碱性磷酸酶pHoD基因和葡萄糖

脱氢酶gcd基因，Ⅲ-8菌株拥有多种方式溶解或矿化磷酸盐，表现出的功能强大。

（3）通过对PseudomonasfluorescensSBW25基因组进行分析，荧光假单胞菌

更偏好降解氮源，对植物多糖类生物质的降解转化能力相对较弱。

（4）通过不同培养氮源，得出荧光假单胞菌对在有机磷培养基上对可溶性玉

米粉利用能力更强，在无机磷培养基上对角蛋白利用能力更强。

关键词：荧光假单胞菌、溶解、基因、可溶性磷。

II

Abstract

PHospHorusisoneoftheessentialnutrientsforplantgrowth.SoilpHospHorus

deficiencyinhibitsnormalplantgrowthandaffectstheabsorptionofotherelements

byplants.MostpHospHorusinthesoilexistsintheformofinsolubleminerals,

makingitdifficultforplantstoabsorbandutilizedirectly.Thediscoveryof

pHospHorus-solubilizingbacteriahasprovidedanewapproachtoaddressingthe

issueofpHospHorusdeficiencyinsoil.Thesebacteriaplayamultifunctionalrolein

improvingtheutilizationefficiencyofsoilpHospHorus,promotingcropgrowthand

development,andenhancingplantresistancetoenvironmentalstress.

Thisstudyemployeddifferentselectivemedia(calciumpHospHateforinorganic

pHospHorus