《生物化学实验仪器设备分析技术》_第四章.pptxVIP

第一节微量移液器

分子生物学是在分子水平上研究生命现象的科学，通过研究生物大分子（核酸、蛋白质）的结构、功能和生物合成等来揭示各种生命现象的本质。本章将介绍分子生物学实验过程中基本仪器设备的使用方法及注意事项等，为相关实验操作奠定基础。微量移液器的组成最早出现于１９５６年，由德国生理化学研究所的科学家Ｓｃｈｎｉｔｇｅｒ发明。１９５８年，德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司开始生产按钮式微量移液器，成为世界上第一家生产微量移液器的公司。微量移液器的吸液范围一般为０５～１０００μＬ，可用于微量移液，是目前进行科学研究、临床检测与诊断必需的基本设备。下一页返回

第一节微量移液器

一、微量移液器的组成部件微量移液器的组成部件包括推动按钮、推动杆、卸枪头（一次性吸头）按钮、刻度调节轮、体积刻度显示屏、吸液杆、卸枪头（一次性吸头）器、可拆卸的枪头（一次性吸头）等，如图４-１所示。二、微量移液器的工作原理微量移液器的工作原理包括两种：使用空气垫移液，又称活塞冲程；使用无空气垫的活塞进行正移动移液。１．空气垫移液器该类移液器适用于固定或可调体积液体的加样。空气垫的作用是将吸于一次性吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来，空气垫通过加样器活塞的弹簧样运动而移动，进而带动吸头中的液体，死体积和一次性吸头中高度的增加决定了加样中空气垫的膨胀程度。上一页下一页返回

第一节微量移液器

因此，活塞移动的体积必须比所希望吸取的体积要大２％～４％。一次性吸头是加样系统的一个重要组成部分，其形状、材料特性及与加样器的吻合程度对加样的准确度有很大的影响。２．活塞正移动移液器该类移液器以活塞正移动为吸力，与空气垫移液器所受物理因素的影响不同。因此，在空气垫移液器难以应用的情况下，活塞正移动加样器可以应用，如具有高蒸气压的、高黏稠度以及密度大于２０ｇ／ｃｍ３的液体；又如在临床聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定中，为防止气溶胶的产生，最好使用活塞正移动移液器。活塞正移动移液器的吸头与空气垫加样器吸头有所不同，其内含一个可与加样器的活塞耦合的活塞。这种吸头一般由生产活塞正移动移液器的厂家配套生产，不能使用通常的吸头或不同厂家的吸头。上一页下一页返回

第一节微量移液器

三、微量移液器的分类１．按工作原理不同分类按工作原理不同，微量移液器可分为空气垫式活塞移液器和外置式活塞移液器。２．按通道数不同分类按通道数不同，微量移液器可分为单道移液器和多道移液器（８道和１２道）。单道移液器又可分为０２～２５μＬ量程、０５～１０μＬ量程、１０～１００μＬ量程、２０～２００μＬ量程、１００～１０００μＬ量程等。３．按操作方式不同分类按操作方式不同，微量移液器可分为手动式移液器和自动式移液器。上一页下一页返回

第一节微量移液器

四、微量移液器的使用方法１．容量设定容量设定可通过容量调节轮的旋转来完成。正确的容量设定有两个步骤：一是粗调，即通过排放按钮将容量值迅速调整至接近需要的预想值；二是细调，当容量值接近需要的预想值以后，应将移液器横置，水平放至在观察者的眼前，通过调节轮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响。在容量设定时，还有一个需要特别注意之处，即从大值调整到小值时，调整到预想值即可；但从小值调整到大值时，需要超１／３圈后再返回。这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。上一页下一页返回

第一节微量移液器

２．吸头安装正确的安装方法是采用旋转安装法。首先，将一次性吸头按照尖端朝下的方式固定在吸头盒中；其次，将移液器的吸液杆顶端插向吸头，在轻轻用力下压的同时，将手中的移液器按逆时针方向旋转１８０°。切记用力不能过猛，更不能采取“剁吸头”的方法来进行安装，以免损伤移液器。３．预洗吸头安装吸头或增大容量值以后，首先，应该把需要转移的液体吸取、排放２～３次，目的是使吸头内壁形成一道同质液膜，以确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有相对较高的重现性。其次，在吸取有机溶剂或高挥发液体时，挥发性气体会在吸液杆室内形成负压，产生漏液的情况，这就需要预洗４～６次，使吸液杆室内的气体达到饱和，如此操作，负压就会自动消失。上一页下一页返回

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４．吸液先将移液器推动按钮按至第一停点，再将吸头垂直浸入液面。浸入的深度为：１０μＬ量程以下的取小于