3.1 重组DNA技术的基本工具课件 高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

第3章第1节

按照人们的愿望，通过转基因等技术赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。主要在生物体外基因（DNA）DNA分子水平基因重组操作环境：操作对象：操作水平：原理：什么是基因工程？

学习目标【基础性目标】1.理解并记忆基因工程的概念2.说出DNA重组技术的基本工具【拓展性目标】阐明重组DNA技术中所需限制性内切核酸酶、DNA连接酶的作用特点、载体需要具备的条件及各自在实现重组DNA分子时的作用。【挑战性目标】模拟制作重组DNA分子3.1重组DNA技术的基本工具

主要来自原核生物识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。工具一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”1.来源：2.种类：数千种限制酶是一类酶3.特点：

EcoRⅠ5’…G-A-A-T-T-C…3’3’…C-T-T-A-A-G…5’SmaⅠ5’…C-C-C-G-G-G…3’3’…G-G-G-C-C-C…5’TaqⅠ5’……T-C-G-A……3’3’……A-G-C-T……5’读：5’→3’4.限制酶所识别的序列的特点：1)大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成,少数的识别序列由4、8个或其他数量的核苷酸组成2)都可以找到一条中心轴线，一条链正向读与另一条链反向读的碱基顺序完全一致1.限制酶识别的序列由几个核苷酸组成？2.你还能发现什么规律？中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列

探究活动一：模拟限制酶切割DNA分子1）依据给出的几种限制酶的识别序列及切割位点，模拟限制酶切割相应DNA片段，并分析限制酶作用的结果。思考：同种限制酶切割的黏性(平)末端一定相同吗？不同种限制酶切出的黏性(平)末端一定不同吗？

EcoRISmaI5’-G3’-CTTAAAATTC-3’G-5’5’-CCC3’-GGGGGG-3’CCC-5’或或SpeIXbaI5’-A3’-TGATCCTAGT-3’A-5’5’-T3’-AGATC或CTAGA-3’T-5’或平末端黏性末端黏性末端黏性末端5.限制酶作用结果：产生黏性末端或平末端

识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端同尾酶

探究活动一：模拟限制酶切割DNA分子2）观察给出的DNA片段1的序列，选择限制酶切割得到Bt抗虫蛋白基因。EcoRIEcoRI

思考：要想获得Bt抗虫蛋白基因必须要用限制酶切几次？可产生几个黏性(平)末端？切2次，产生4个黏性(平)末端。含Bt抗虫蛋白基因的DNA分子探究活动一：模拟限制酶切割DNA分子

限制性内切核酸酶能否把获得的Bt抗虫蛋白基因直接导入到受体细胞内？

质粒、动植物病毒、噬菌体等将外源基因送入受体细胞。裸露、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA外，具有自我复制能力的环状双链DNA。工具二、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1.作用：2.种类：

1.质粒要与目的（外源）基因连接，需要具备什么条件？2.要使质粒携带目的（外源）基因进入受体细胞后能稳定存在，表达出产物并且遗传给子代，质粒需要具备什么条件？3.质粒是否进入受体细胞，我们无法直接观察，为了便于筛选重组DNA分子，载体需要具备什么条件？条件①：具有一个或多个限制酶切割位点；条件②：能在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；条件③：具有标记基因，便于重组DNA分子的筛选。条件④：载体DNA必须是安全的，不会对受体细胞有害。分析归纳载体（以质粒为例）需要具备的条件

探究活动二：模拟限制酶切割质粒选择合适的限制酶切割质粒1，断开相应的位点。质粒1

限制性内切核酸酶如何把获得的Bt抗虫蛋白基因和载体连接在一起？

种类______________________________________来源大肠杆菌T4噬菌体作用E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶都能将双链DNA片段“缝合“起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。2.种类：区别E.coliDNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率远远低于T4DNA连接酶工具三、DNA连接酶——“分子缝合针”1.作用：(1)将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。

工具三、DNA连接酶——“分子缝合针”探究活动三：模拟DNA连接酶的作用1.随机抽取两个上述活动中形成的DNA片段，判断两个片段是否可以连接。