CN108779439A 利用低分子化合物的由成熟肝细胞制作肝干细胞-前体细胞的制作方法 （国立研究开发法人国立癌症研究中心）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN108779439A

(43)申请公布日2018.11.09

(21)申请号201780005945.4

(22)申请日2017.01.06

(30)优先权数据

2016-0030882016.01.08JP

(85)PCT国际申请进入国家阶段日

2018.07.06

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/JP2017/0003422017.01.06

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2017/119512JA2017.07.13

(71)申请人国立研究开发法人国立癌症研究中

心

地址日本东京都

申请人CYNITY株式会社

(72)发明人落谷孝广胜田毅

(74)专利代理机构北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙)11277

代理人刘新宇李茂家

(51)Int.CI.

C12N5/071(2010.01)

A61K35/407(2015.01)

A61P1/16(2006.01)

C12Q1/02(2006.01)

权利要求书2页说明书16页附图10页

(54)发明名称

利用低分子化合物的由成熟肝细胞制作肝干细胞/前体细胞的制作方法

(57)摘要

CN108779439A本发明提供一种由肝细胞制作肝干细胞/前体细胞的制作方法，其包括：使哺乳动物的肝细胞与TGFβ受体抑制药在体外接触、以及任意地还包括使哺乳动物的肝细胞与GSK3

CN108779439A

CN108779439A权利要求书1/2页

2

1.一种由肝细胞制作肝干细胞/前体细胞的制作方法，其包括：使哺乳动物的肝细胞在体外与TGFβ受体抑制药接触。

2.根据权利要求1所述的方法，其还包括：使GSK3抑制药和/或ROCK抑制药在体外与所述肝细胞接触。

3.根据权利要求1所述的方法，其还包括：使GSK3抑制药和ROCK抑制药在体外与所述肝细胞接触。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述肝细胞与所述TGFβ受体抑制药的接触通过在该抑制药的存在下对该肝细胞进行培养来实施。

5.根据权利要求2～4中任一项所述的方法，其中，所述肝细胞与所述GSK3抑制药和/或所述ROCK抑制药的接触通过在该抑制药的存在下对该肝细胞进行培养来实施。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，哺乳动物为人、大鼠或小鼠。

7.一种由肝细胞诱导肝干细胞/前体细胞的肝干细胞/前体细胞诱导剂，其是含有TGFβ受体抑制药而成的。

8.根据权利要求7所述的诱导剂，其是GSK3抑制药和/或ROCK抑制药组合而成的。

9.根据权利要求7所述的诱导剂，其是GSK3抑制药和ROCK抑制药组合而成的。

10.根据权利要求7～9中任一项所述的诱导剂，其中，肝细胞源自人、大鼠或小鼠。

11.一种源自哺乳动物的肝细胞的肝干细胞/前体细胞，其具有以下的特征：

(a)具有自身再生能力，

(b)能够分化为肝细胞和胆管上皮细胞这两者，

(c)作为表面抗原标记物，表达EpCAM,但是不表达Dlk1。

12.根据权利要求7～10中任一项所述的诱导剂，其被用作通过权利要求1～6中任一项所述的方法得到的肝干细胞/前体细胞或权利要求11所述的肝干细胞/前体细胞的维持/扩增剂。

13.一种细胞的维持/扩增方法，其特征在于，其为通过权利要求1～6中任一项所述的方法得到的肝干细胞/前体细胞或权利要求11所述的肝干细胞/前体细胞的维持/扩增方法，

(i)第1继代直至第4继代为止在用胶原或基质胶涂覆的培养容器上，(ii)第5继代及以后在用基质胶涂覆的培养容器上，

在TGFβ受体抑制药、GSK3抑制药和ROCK抑制药的存在下对该肝干细胞/前体细胞进行继代培养。

14.一种胆管上皮细胞的诱导方法，其为由通过权利要求1～6及13中任一项所述的方法得到的肝干细胞/前体细胞或权利要求11所述的肝干细胞/前体细胞诱导胆管上皮细胞的方法，其包括：

(i)在低密度的饲养细胞上，在TGFβ受体抑制药、GSK3抑制药和ROCK抑制药的存在下对该肝干细胞/前体细胞进行培养的工序；和

(ii)将工序(i)中得到的细胞在含有基质胶的培养基中进一步培养的工序。

15.一种评价方法，其为评价被检化合物在哺乳动物体内的代谢的方法，其包括：

(i)使由通过权利要求1～6及13中任一项所述的方法得到的肝干细胞/前