CN108779439B 利用低分子化合物的由成熟肝细胞制作肝干细胞-前体细胞的制作方法 （埃维亚生命科学有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN108779439B(45)授权公告日2023.05.30

(21)申请号201780005945.4

(22)申请日2017.01.06

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN108779439A

(43)申请公布日2018.11.09

(30)优先权数据

2016-0030882016.01.08JP

(85)PCT国际申请进入国家阶段日2018.07.06

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/JP2017/0003422017.01.06

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2017/119512JA2017.07.13

(73)专利权人埃维亚生命科学有限公司地址美国特拉华州

(72)发明人落谷孝广胜田毅

(51)Int.CI.

C12N5/071(2010.01)

A61K35/407(2015.01)

A61P1/16(2006.01)

C12Q1/02(2006.01)

(56)对比文件

CN105154386A,2015.12.16

CN103380212A,2013.10.30

CN105143445A,2015.12.09

US2010209404A1,2010.08.19

侯艺鑫等.解毒凉血方对肝卵圆细胞向成熟肝细胞的诱导分化作用和机制研究.《中华中医药杂志》.2012,第27卷(第8期),第2060-2064页.

张立煌，吴嘉庚，姚航平，李敏伟.抗纤方抑制TGF-β_1诱导肝细胞凋亡的实验研究.中国中西医结合杂志.2001,第21卷(第1期),第37-39

页.

审查员谢庆宁

(74)专利代理机构中科专利商标代理有限责任

公司11021

专利代理师张莹权利要求书2页说明书16页附图10页

(54)发明名称

利用低分子化合物的由成熟肝细胞制作肝干细胞/前体细胞的制作方法

(57)摘要

CN108779439B本发明提供一种由肝细胞制作肝干细胞/前体细胞的制作方法，其包括：使哺乳动物的肝细胞与TGFβ受体抑制药在体外接触、以及任意地还包括使哺乳动物的肝细胞与GSK3抑制药和/或ROCK

CN108779439B

b

CN108779439B权利要求书1/2页

2

1.一种由成熟的哺乳动物肝细胞制作肝干细胞/前体细胞的制作方法，其包括使所述肝细胞在体外与TGFβ受体抑制药接触，其中所述方法还包括使GSK3抑制药和ROCK抑制药在体外与所述肝细胞接触，其中所述方法在不对所述肝细胞实施基因修饰的情况下进行，其中所述肝干细胞/前体细胞具有以下的特征：(a)具有自身再生能力，(b)能够分化为肝细胞和胆管上皮细胞这两者，和(c)作为表面抗原标记物，表达EpCAM,但是不表达D1k1,其中所述TGFβ受体抑制药选自由2-(5-苯并[1,3]二氧环戊烯-4-基-2-叔丁基-1H-咪唑-4-基)-6-甲基吡啶、3-(6-甲基吡啶-2-基)-4-(4-喹啉基)-1-苯基硫代氨基甲酰基-1H-吡唑、2-(5-氯-2-氟苯基)蝶啶-4-基)吡啶-4-基胺、3-(吡啶-2-基)-4-(4-醌基)]-1H-吡唑、2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,5-二氮杂萘和SB431542组成的组，所述GSK3抑制药选自由SB216763、CHIR98014、CHIR99021、SB415286和Kenpaullone组成的组，和所述ROCK抑制药选自由GSK269962A、盐酸法舒地尔、Y-27632和H-1152组成的组。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肝细胞与所述TGFβ受体抑制药的接触通过在该抑制药的存在下对该肝细胞进行培养来实施。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述肝细胞与所述GSK3抑制药和所述ROCK抑制药的接触通过在所述GSK3抑制药和所述ROCK抑制药的存在下对该肝细胞进行培养来实施。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述哺乳动物为人、大鼠或小鼠。

5.一种药剂在用于由肝细胞体外诱导制作肝干细胞/前体细胞的方法中的用途，其中所述药剂含有TGFβ受体抑制药、GSK3抑制药和ROCK