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生物化学实验流程标准指导书

前言

本指导书旨在为生物化学实验操作提供一套标准化的流程与规范，确保实验结果的准确性、可靠性与可重复性，同时保障实验人员的安全与实验室环境的整洁。本指导书适用于各类基础及部分intermediate生物化学实验，实验操作者在进行相关实验前应仔细阅读并严格遵守。生物化学实验具有一定的复杂性与潜在风险，严谨的态度、规范的操作是实验成功的基石。

一、实验前准备

1.1实验方案理解与确认

实验操作者在开始实验前，必须对实验目的、原理、预期结果及可能存在的风险有充分理解。仔细研读实验指导书或相关文献，明确每一步操作的意义与关键点。如有疑问，应及时与指导教师或资深实验人员沟通确认，不得在理解不清的情况下盲目操作。

1.2实验材料与试剂准备

根据实验方案，提前准备好所需的全部实验材料、试剂及耗材。

*材料检查：核对样品信息，确保其来源、状态符合实验要求，如细胞代数、组织新鲜度等。

*试剂检查：逐一核对试剂名称、规格、批号、有效期。观察试剂外观是否正常，有无浑浊、沉淀、变色、泄漏等情况。对于需要特殊储存条件（如避光、低温、干燥）的试剂，使用前确认其储存条件是否合规。

*试剂预处理：部分试剂使用前需进行复溶、稀释、预热或平衡至室温等处理，应严格按照试剂说明书或实验方案进行。

*耗材准备：如离心管、移液器吸头、培养皿、烧杯、试管等，确保数量充足、质量合格，并根据需要进行灭菌或洁净处理。

1.3实验仪器准备与检查

*仪器熟悉：操作不熟悉的仪器前，务必阅读仪器操作规程，或在熟悉该仪器的人员指导下进行。

*状态检查：开机前检查仪器电源线、数据线连接是否完好，各部件是否处于正常位置。对于需要预热或校准的仪器（如分光光度计、PCR仪、离心机），应提前进行预热或校准。

*功能测试：必要时进行简单的功能测试，确保仪器运行正常。

1.4个人防护与实验台面准备

*个人防护：实验时必须穿着合适的实验服，佩戴防护眼镜。根据实验需要，佩戴一次性手套、口罩、帽子等。长发需束起，不穿露趾鞋。

*台面清洁：实验开始前，用75%乙醇或其他合适的消毒剂擦拭实验台面，确保操作区域洁净、整齐、无无关物品。

二、实验操作流程

2.1样品处理

*样品接收与标识：接收样品后，立即核对样品信息，清晰、规范地标记样品名称、编号、日期等关键信息，避免混淆。

*样品分装与保存：对于珍贵或需长期保存的样品，应进行适当分装，避免反复冻融。按照规定条件（如-80℃、-20℃、4℃或液氮）保存，并记录保存位置和时间。

*样品裂解/提取：根据样品类型（如组织、细胞、血液、微生物等）选择合适的裂解或提取方法。严格控制操作条件，如温度、pH、时间、离心速度与时间等，以保证目标物质的完整性和提取效率。操作过程中避免样品交叉污染。

2.2试剂配制与使用

*精确称量：固体试剂使用分析天平称量，注意天平的校准、水平及操作环境。液体试剂使用移液管或移液器准确量取。称量和量取应遵循“少量多次”原则，减少误差。

*溶解与混匀：选择合适的溶剂和溶解方法。溶解过程中可采用搅拌、超声等辅助手段，但需注意避免过热或剧烈搅拌导致试剂变性或分解。试剂溶解后应充分混匀。

*pH调节：如需调节溶液pH，应使用合适的酸或碱缓慢滴加，边加边搅拌，并用pH计实时监测，避免过调。

*过滤与灭菌：对需要无菌或无颗粒的溶液，应进行过滤（如0.22μm滤膜）或高压灭菌处理。灭菌后的溶液需冷却至适宜温度再使用或储存。

*试剂分装与标记：配制好的试剂应分装到洁净容器中，清晰标记试剂名称、浓度、pH（如适用）、配制日期、配制人及有效期。

*规范使用：取用试剂时，注意保持试剂瓶的清洁，避免交叉污染。固体试剂用洁净药匙取用，液体试剂用专用移液管或移液器取用。试剂取用后及时盖紧瓶盖，放回原储存位置。

2.3反应体系构建

*实验设计：明确实验分组（如对照组、实验组、复孔数等），计算各组分所需体积。

*移液器使用：选择合适量程的移液器和配套吸头。吸头安装要紧密，吸液和放液操作规范，避免气泡产生和液体残留。同一实验最好使用同一把移液器以减少系统误差。

*加样顺序：通常按照“先加缓冲液，再加底物/样品，最后加酶/关键反应因子”的顺序进行。特殊实验有特定加样顺序的，按实验要求执行。

*体积准确性：严格按照计算体积加样，加样过程中注意核对，避免漏加、错加或多加。

*充分混匀：反应体系构建完成后，应进行充分混匀。可采用涡旋混匀或轻柔吹打（对敏感成分如RNA、蛋白质），避免剧烈操作导致成分变性或气泡产生。必要时进行短暂离心，使反应液集中于管底。

2.4反应条件控制

*温度控制：根据实验要求，将