CN1710424A 胶体金标记法快速检测西维因试纸条及其制作方法与应用 （天津科技大学）.docxVIP

[19]中华人民共和国国家知识产权局

[12]发明专利申请公开说明书

[21]申请号200510013371.4

[51]Int.Cl?

G01N33/558

G01N33/548

G01N33/531G01N21/78G01N33/52

[43]公开日2005年12月21日[11]公开号CN1710424A

[22]申请日2005.4.28

[21]申请号200510013371.4

[71]申请人天津科技大学

地址300222天津市河西区大沽南路1038号[72]发明人王硕王俊平张燕

[74]专利代理机构天津市学苑有限责任专利代理事务所

代理人李明

权利要求书3页说明书9页附图1页

[54]发明名称胶体金标记法快速检测西维因试纸条及其制作方法与应用

[57]摘要

胶体金标记法快速检测西维因试纸条及其制作方法与应用，属于农药西维因残留快速免疫分析领域，涉及胶体金标记小分子快速检测试纸条及其制作与应用技术。目前尚未有胶体金标记小分子物质快速免疫检测纸条技术。本发明为包被有农药西维因人工抗原和羊抗兔二抗的硝酸纤维素膜，并以高特异性西维因抗体为免疫检测抗体，胶体金作为检测反应标记物，采用直接竞争免疫检测法，通过反应混合液垂直流过或层析扩散的方式，在短时间内完成免疫反应，获得可直接观察的检测结果。本发明填补了胶体金标记农药西维因快速检测试纸条的空白。它具有良好的抗干扰能力，反应速度快，检测灵敏度高，结果精确，具有良好的应用前景，既有经济效益又有社会效益。

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知识产权出版社出版

200510013371.4权利要求书第1/3页

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1.胶体金标记法快速检测西维因试纸条，其特征在于它是包被有农药西维因半抗原与OVA连接的人工抗原作为检测线区A和羊抗兔二抗作为试纸条有效性标准线区B的条状固相载体膜，其中固相载体膜采用硝酸纤维素膜。

2.按照权利要求1所述的胶体金标记法快速检测西维因试纸条，其特征在于农药西维因半抗原采用200410020332.2号专利申请中的半抗原，半抗原与OVA连接的人工抗原浓度为10?3mg/L,试纸条其规格为1.0-2.2cm×4.5-9.0cm,A、B两个区域的宽度相等，皆为3-5mm,A、B两个区域相距10-15mm。

3.权利要求1或2所述的胶体金标记法快速检测西维因试纸条的制作方法，其特征在于经过点样、固定、封闭，冲洗工序固定到固相载体膜上，其具体做法如下：

·包被

用笔在固相载体膜上标记出A、B两个区域，A区为检测线区，B区为试纸条有效性标准线区，然后在上述条状固相载体膜上分别在检测线区域涂布西维因半抗原与OVA连接合成的西维因人工抗原，在标准线区域涂布羊抗兔二抗PBS稀释液，固相载体膜采用硝酸纤维素膜；

·固定

包被完后，先在室温下固定5-10分钟，再在30℃的恒温箱中固定40-60分钟，让人工抗原和二抗在硝酸纤维素膜上充分固定；

·封闭

将固定好的抗体的硝酸纤维素膜浸泡在1-2%的白明胶磷酸缓冲液溶液中5-10分钟，在30℃的恒温箱中封闭20-40分钟；

·干燥

将封闭好的硝酸纤维素膜，用含0.5ml/L吐温-20的磷酸缓冲液即PBST洗涤液冲洗三次，轻轻甩掉多余的水分，然后将冲洗完后的膜37℃下放置30分钟干燥或冻干，于4℃下密闭保存；

通过以上工序即完成了胶体金标记农药西维因快速检测试纸条的制作。

4.按照权利要求3所述的胶体金标记法快速检测西维因试纸条的制作方法，其特征在于包被所用的半抗原采用200410020332.2号专利申请中的西维因半抗原，西维因半抗原与OVA连接合成的西维因人工抗原浓度为102mg/L,硝酸纤维素膜采用规格为1.8-2.2cm×4.5-9.0cm,包被时用笔在固相载体膜上与载体膜一端距离为5-10mm处，依次标记出A、B两个区域，A、B两个区域相距10-15mm,宽度皆为3-5毫米，然后用自动铺板机在上述条状固相载体膜上分别在检测线区

200510013371.4权利要求书第2/3页

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域涂布西维因半抗原与OVA连接合成的西维因人工抗原0.5-2μ1