第三篇基因信息的传递.pptVIP

;CentralDogma;复制(replication)

是指遗传物质的传代，以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。;第一节;一、半保留复制的实验依据和意义;密度梯度实验;DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。;A.环状双链DNA及复制起始点

B.复制中的两个复制叉

C.复制接近终止点(termination,ter);真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。

习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon)。复制子是独立完成复制的功能单位。;5’;三、复制的半不连续性;顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。

另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为岡崎片段(okazakifragment)。

领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。;DNA复制的酶学

TheEnzymologyofDNAReplication;参与DNA复制的物质;一、复制的化学反应;聚合反应的特点;二、DNA聚合酶;5′AGCTTCAGGATA?3′

|||||||||||;（一）原核生物的DNA聚合酶;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。;323个氨基酸;DNA-polⅡ（120kD）;功能

是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。;（二）真核生物的DNA聚合酶;三、复制保真性的酶学依据;（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读;A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活性掺入正确配对的底物。

B：碱基配对正确，DNA-pol不表现活性。;（二）复制的保真性和碱基选择;1.遵守严格的碱基配对规律；

2.聚合酶在复制延长时对碱基的选择功???；

3.复制出错时DNA-pol的及时校读功能。;四、复制中的分子解链及DNA分子拓扑学变化;（一）解螺旋酶和单链DNA结合蛋白;解螺旋酶(helicase)

——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链

引物酶(primase)

——复制起始时催化生成RNA引物的酶

;单链DNA结合蛋白(singlestrandedDNAbindingprotein,SSB)

——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整;;拓扑异构酶作用特点

既能水解、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;五、DNA连接酶;HO;DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。

在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。

也是基因工程的重要工具酶之一。;（一）复制的起始;E.coli复制起始点oriC;2）解螺旋酶解开双链;;引物酶;;复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，在电子显微镜下均看到伸展成叉状的复制现象，称为复制叉。

在DNA聚合酶III的作用下，新链第一个脱氧核苷酸就加到引物的3’-OH末端上，形成磷酸二酯键。复制开始。;（二）复制的延长;5;领头链的合成：DDDP沿着模板3’?5’滑动，第一个进入配对的dNTP与RNA引物上的3’－OH形成3’,5’－磷酸二酯键，留下3’－OH继续合成;;两条链是在同一个DNA-polⅢ的催化下进行延长的过程;阶段一;阶段三;原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。;5?;复制过程简图;哺乳动物的细胞周期;?真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。

?复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replicationfactor,RF)。

?增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。;3?;染色体DN