CN1987439B 适用于量热式农药快速检测的固定化酶的制作方法 （上海理工大学）.docxVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN1987439B

(45)授权公告日2010.04.21

(21)申请号200610147245.2

(22)申请日2006.12.14

(73)专利权人上海理工大学

地址200093上海市杨浦区军工路516号

(72)发明人徐斐姜觅胥义华泽钊马天画

(74)专利代理机构上海申汇专利代理有限公司

31001

代理人吴宝根

(51)Int.CI.

GO1N25/20(2006.01)

GO1N33/48(2006.01)

5.2003,24(5),122-126.

郑艺华等.用于有机磷农药残留快速检测的酶法量热式流动注射分析检测仪.仪器仪表学报267.2005,26(7),733-737.

王聪颖等.酶在土壤农药污染修复中的研究进展.农业环境科学学报24(增刊).2005,(24(增刊)),371-374.

审查员冯志华

(56)对比文件

JP特开2004-61496A,2004.02.26,全文.

JP特开2005-265737A,2005.09.29,全文.

US6692696B1,2004.02.17,全文.

CN2695967Y,2005.04.27,全文.

CN2519909Y,2002.11.06,全文.

许学勤等.用于有机磷农药残留快速

检测的固定化小麦酯酶研究.食品科学24

权利要求书1页说明书3页附图1页

(54)发明名称

适用于量热式农药快速检测的固定化酶的制作方法

(57)摘要

CN1987439B本发明公开了一种适用于量热式农药快速检测的固定化酶的制作方法，其特点是该固定化酶由从动植物体中提取的B-酯酶和从蔬菜中提取的酚氧化酶组成，制作方法步骤为：1)酶液的提取；2)酶的部分纯化；3)酶的固定化。由本方法制

CN1987439B

热

热流(m)

1.4

1.2

0.8

0.40.2

20040010001200

反应时间(S)

CN1987439B权利要求书1/1页

2

1.一种适用于量热式农药快速检测的固定化酶的制作方法，其特征在于，所述的固定化酶由从动植物体中提取的B-酯酶和从蔬菜中提取的酚氧化酶组成，制作方法步骤为：

1)酶液的提取

动物组织按1:3的比例加入pH中性的缓冲液，进行组织破碎；或植物组织干磨碎后按1:5的比例加入pH中性的缓冲液，进行搅拌提取；离心分离得B-酯酶粗酶液；蔬菜原料按1:1的比例加入pH中性的缓冲液，进行组织破碎、离心分离得酚氧化酶粗酶液；

2)酶的部分纯化

用30%和80%饱和度的硫酸铵溶液依次对B-酯酶粗酶液和酚氧化酶粗酶液进行分级沉淀，之后用超滤除去小分子盐；

3)酶的固定化

将部分纯化的B-酯酶酶液和酚氧化酶酶液按1:4～1:10的活力比例混合，与处理好的OH型阴离子交换树脂一起搅拌固定，4-5小时后，用蒸馏水洗去未固定上的酶液，将洗净的固定化酶存于中性缓冲液中待用。

CN1987439B说明书1/3页

3

适用于量热式农药快速检测的固定化酶的制作方法

技术领域

[0001]本发明涉及一种适用于量热式农药快速检测的固定化酶的制作方法，属农药快速检测领域。

背景技术

[0002]目前，国内外研究的快速检测农药残留的方法主要有：酶联免疫吸附分析法、酶片法(速测卡法)、农药残留分光光度计法和生物传感器法等。这些方法大多是通过检测酶催化反应得到的电化学活性物质或有色物质的多少，来反映样品中的农药残留的高低。然而，由于食品样品的组分多样性，这种方法容易受样品中其他电化学活性物质或光学物质的干扰，造成结果的不准确性。

[0003]利用生化反应过程中普遍伴随的热量变化，采用量热的方式来进行分析，具有通用性强、适用于大多数生化样品、在测量时不受其他电化学活性物质或光学物质的干扰等优点。然而，由于生化反应产生的热量往往比较